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小鼠ELISA試劑盒樣本操作步驟
閱讀：108 發(fā)布時(shí)間：2019-4-18| 提 供 商 | 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 13KB |
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小鼠ELISA試劑盒樣本操作步驟
樣本處理及要求：
1. 血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè),，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比,，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,，或反復(fù)凍融,。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè),。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘,，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響*后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè),。
標(biāo)本處理
1. 本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),，不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,，預(yù)留充足的樣本,。
2. 實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)標(biāo)本含量,，如果標(biāo)本濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋,，使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測(cè)范圍,，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2),。
3. 若所檢樣本不包含在說(shuō)明書(shū)所列樣本之中,，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性，并注意留存樣本,。
4. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差,。
5. 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多,，如：細(xì)胞狀態(tài),、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等,，所以可能存在檢測(cè)不出的情況,。
6. 某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白,，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配,，而不被檢測(cè)出。
7. 建議使用新鮮樣本,，保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差,。