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    方法類型和操作步驟如下：ELISA可用于測(cè)定抗原,，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體,，②酶標(biāo)記的抗原或抗體,，③酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件,，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法,。

    （一）雙抗體夾心法

     雙抗體夾心法：是檢測(cè)抗原常用的方法，操作步驟如下：

    （1）將特異性抗體與固相載體連接,，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì),。

    （2）加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合,，形成固相抗原復(fù)合物,。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。

    （3）加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合,。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體,。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。

    （4）加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物,。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量,。

    根據(jù)同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物,，即可用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中的抗體,。

    （二）雙位點(diǎn)一步法

    在雙抗體夾心法測(cè)定抗原時(shí)，如應(yīng)用針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體,，則在測(cè)定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步,。這種雙位點(diǎn)一步不但簡化了操作，縮短了反應(yīng)時(shí)間,，如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體,，測(cè)定的敏感性和特異性也顯著提高,。單克隆抗體的應(yīng)用使測(cè)定抗原的ELISA提高到新水平。

    在一步法測(cè)定中,，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)（hookeffect）,，類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測(cè)抗原濃度相當(dāng)高時(shí),，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合,，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實(shí)際含量,。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果,。

   （三）間接法測(cè)抗體

    間接法是檢測(cè)抗體常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體,，故稱為間接法,。操作步驟如下：

    （1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì),。

    （2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合,，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合,，在洗滌過程中被洗去,。

    （3）加酶標(biāo)抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶,。洗滌后,，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測(cè)人對(duì)某種疾病的抗體,，可用酶標(biāo)羊抗人IgG抗體,。

     每個(gè)試劑盒操作是不同的，請(qǐng)按說明書操作,。具體事項(xiàng)請(qǐng)lai電咨xun,！