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購買細(xì)胞處理方法和注意事項(xiàng)

*客戶收到細(xì)胞后請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)閱讀細(xì)胞注意事項(xiàng)及細(xì)胞使用說明書,，確保細(xì)胞的培養(yǎng)條件一致及售后服務(wù)判定標(biāo)準(zhǔn),。

我們公司貼壁細(xì)胞的常規(guī)運(yùn)輸方式是將細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿新鮮的*培養(yǎng)液并封好瓶口進(jìn)行運(yùn)輸,。冬季溫度比較低的情況下,，我們會(huì)根據(jù)收貨人所在省份的平均溫度高低和距離采取對(duì)細(xì)胞不同狀態(tài)下發(fā)貨,，包括活細(xì)胞瓶裝發(fā)貨,、活細(xì)胞胰酶消化離心后血清發(fā)貨,、凍存管發(fā)貨?？蛻羰盏郊?xì)胞后請(qǐng)嚴(yán)格按照以下要求進(jìn)行操作,。

1.客戶在收到瓶裝細(xì)胞后，先觀察培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否外滲,，培養(yǎng)液是否混濁，若出現(xiàn)破裂,、滲液,、培養(yǎng)液混濁等問題，請(qǐng)?jiān)谑盏郊?xì)胞后的當(dāng)天與我們的銷售或技術(shù)支持聯(lián)xi,，我們會(huì)及時(shí)處理

2.細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿新鮮的*培養(yǎng)液(內(nèi)含細(xì)胞培養(yǎng)的血清含量和雙抗),，封好瓶口是我們正常運(yùn)輸細(xì)胞的方法,。細(xì)胞出庫前都是處于無菌狀態(tài)，并且生長(zhǎng)良好,，我們也會(huì)對(duì)出庫細(xì)胞進(jìn)行拍照留檔,。（建議客戶在收到我們的細(xì)胞時(shí)將培養(yǎng)液拍張照片，觀察培養(yǎng)液的顏色以及是否漏液,，觀察細(xì)胞時(shí)請(qǐng)拍100X,、200X 各2-3 張照片進(jìn)行留存，方便后期細(xì)胞狀態(tài)的對(duì)比,，拍攝的照片應(yīng)當(dāng)清晰,。）

3.客戶在收到貼壁瓶裝細(xì)胞后不開封，先將培養(yǎng)瓶外表面用75%酒精擦拭干凈,， 鏡檢細(xì)胞貼壁情況,。若貼壁良好，請(qǐng)將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2H 后拿出,，瓶蓋開啟前請(qǐng)將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒,、過火，再將多余培養(yǎng)液抽出進(jìn)行繼續(xù)培養(yǎng),，或直接進(jìn)行

細(xì)胞傳代(消化,、傳代步驟詳見細(xì)胞使用說明書)；若貼壁細(xì)胞有部分細(xì)胞懸浮,，請(qǐng)先將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2H 后拿出,，瓶蓋開啟前請(qǐng)將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒、過火,，將培養(yǎng)液抽出,，依次離心(1000rmp 5min)將懸浮細(xì)胞收集后放回原瓶進(jìn)行過夜培養(yǎng)，并次日觀察貼壁情況,。如細(xì)胞仍不能貼壁,， 請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活力，證實(shí)細(xì)胞無活力,，請(qǐng)將細(xì)胞拍照(多倍數(shù)多視野) 及染色照片發(fā)送至技術(shù)支持的you箱,，我們會(huì)盡快處理。(以上僅為貼壁細(xì)胞處理方法),。

4.客戶在收到懸浮瓶裝細(xì)胞后不開封,，先將培養(yǎng)瓶外表面用酒精擦拭干凈，鏡檢細(xì)胞狀態(tài),。若狀態(tài)良好,，請(qǐng)將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2H 后拿出，瓶蓋開啟前請(qǐng)將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒、過火,，將整瓶細(xì)胞懸液分別離心(1000rmp 5min)后收集于離心管中,，視其離心后的細(xì)胞量進(jìn)行放回培養(yǎng)或分瓶培養(yǎng)。(以上僅為懸浮細(xì)胞處理方法),。

5.客戶在收到半懸浮瓶裝細(xì)胞后不開封,，先將培養(yǎng)瓶外表面用酒精擦拭干凈，鏡檢細(xì)胞狀態(tài),。若狀態(tài)良好,，請(qǐng)將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2H 后拿出，瓶蓋開啟前請(qǐng)將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒,、過火,， 將整瓶細(xì)胞懸液中的上層懸浮細(xì)胞離心(1000rmp 5min)

后收集于離心管中,，重懸細(xì)胞后放回原瓶與貼壁細(xì)胞共同培養(yǎng)至傳代,。重懸上層懸浮細(xì)胞時(shí)必須保持下層貼壁細(xì)胞的營養(yǎng)條件，防止貼壁細(xì)胞缺乏營養(yǎng),。(以上僅為半懸浮細(xì)胞處理方法),。

6.若客戶收到1.8ml 離心管常溫細(xì)胞，收到細(xì)胞后觀察是否管裂,、漏液,、污染， 若有以上任何一種現(xiàn)象,，請(qǐng)立即拍照后聯(lián)xi我們,。若無以上現(xiàn)象，請(qǐng)用75% 酒精對(duì)離心管進(jìn)行消毒后放到操作臺(tái)內(nèi),，嚴(yán)格無菌操作,，過火打開管蓋，將管中的血清細(xì)胞輕輕吹

打幾下,， 取出后放入15ml 離心管中,， 加入雙倍或3 倍的*培養(yǎng)液1000rmp/5min離心，棄上清重懸后與對(duì)應(yīng)的*培養(yǎng)液混勻,，加入到培養(yǎng)瓶中過夜培養(yǎng),，第二天觀察細(xì)胞狀態(tài)和密度。若密度未達(dá)85%則繼續(xù)培養(yǎng),， 若達(dá)85%以上則可直接進(jìn)行傳代,。

收到細(xì)胞過夜培養(yǎng)24h 后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染或者狀態(tài)不佳，必須在發(fā)現(xiàn)問題的當(dāng)天即刻向我們銷售人員反饋,。(以上僅為血清運(yùn)輸細(xì)胞處理方法),。

7.若客戶收到凍存管細(xì)胞，請(qǐng)盡快復(fù)蘇。復(fù)蘇方法：1,、37°水浴晃動(dòng)直至融化（不要超過一分鐘）,，移至15ml 離心管，另加入3-5 倍*培養(yǎng)液,，1000rmp

5min,，棄上清，放入25cm2 瓶中培養(yǎng),，第二天拍照留存有效信息,。2、37°水浴晃動(dòng)直至融化（不要超過一分鐘）,，直接放進(jìn)加有6-8ml 培養(yǎng)基的25cm2 瓶中培養(yǎng),，16 小時(shí)之后必須換液并拍照留存有效信息。

8.傳代注意事項(xiàng)
胰酶消化的過程至關(guān)重要,。消化過度細(xì)胞會(huì)粘連拉絲,，嚴(yán)重影響細(xì)胞活性和后期狀態(tài)；消化不*則細(xì)胞難以從瓶壁自行脫落,，反復(fù)對(duì)細(xì)胞表面進(jìn)行吹打會(huì)損傷細(xì)胞活性,，導(dǎo)致細(xì)胞后期狀態(tài)差、增值能力低下以及細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,。影響消化的因素有很多,，主

要包括胰酶溶液的活性（配置條件、低溫保存時(shí)間長(zhǎng)短,、是否反復(fù)凍融,，解凍后的存放時(shí)間及溫度等）、消化細(xì)胞時(shí)的溫度（建議在37°培養(yǎng)箱中消化）,、胰酶所加的量（以T25 為例,，一個(gè)T25 加1ml 胰酶）、細(xì)胞的密度（同株細(xì)胞不同密度下胰酶對(duì)細(xì)胞的消化時(shí)間也不同,，密度稀消化時(shí)間快,，密度大消化時(shí)間相對(duì)較慢）等。不同細(xì)胞對(duì)胰酶的敏感性也不同,，對(duì)于新購買的細(xì)胞,，建議客

戶用含0.25EDTA 的胰酶消化液先培養(yǎng)箱持續(xù)消化1-2min，鏡下觀察細(xì)胞是否變圓,，直至細(xì)胞*脫落或者輕拍瓶壁*脫落,。記錄*佳消化時(shí)間， 下一次操作參考之前的記錄來控制時(shí)間即可,。

9.客戶收到細(xì)胞時(shí)無異常,，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,，如貼壁細(xì)胞密度未超過85%則繼續(xù)培養(yǎng)，超過85%時(shí),，請(qǐng)按照細(xì)胞使用說明書進(jìn)行傳代培養(yǎng),；如為懸浮細(xì)胞和半懸浮細(xì)胞，具體操作請(qǐng)按照細(xì)胞使用說明書進(jìn)行操作,。

10.我們公司細(xì)胞株所使用的胎牛血清為進(jìn)口胎牛血清貨號(hào)0500（Sciencell 公司）或ZQ500-A,，胰酶消化液貨號(hào)0103（Sciencell 公司），細(xì)胞凍存液貨號(hào)0133（Sciencell公司）,，胰酶終止液0113（Sciencell 公司）,。

11.我們公司認(rèn)為細(xì)胞購買者或使用者均有細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，客戶收到細(xì)胞,，原瓶里的培養(yǎng)液可以重新收集使用（僅適用于近距離運(yùn)輸?shù)目蛻簦?。在次消化傳瓶時(shí)，我們建議客戶留部分細(xì)胞繼續(xù)使用我們的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),，另外一部分細(xì)胞客戶可使用自己的培養(yǎng)液培養(yǎng),，這樣可減少由于細(xì)胞不適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境而導(dǎo)致的細(xì)胞培養(yǎng)問題，并且能對(duì)細(xì)胞的培養(yǎng)環(huán)境做出對(duì)比,。如果兩組細(xì)胞的生長(zhǎng)速度和細(xì)胞狀態(tài)無明顯變化,，客戶可繼續(xù)培養(yǎng)擴(kuò)增,，如果兩組細(xì)胞在生長(zhǎng)速度和細(xì)胞狀態(tài)上有微妙或明顯的變化,，那么我們建議客戶需要更換更好的血清培養(yǎng)細(xì)胞。