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人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞細(xì)胞株培養(yǎng)的的技術(shù)要求
閱讀：125 發(fā)布時(shí)間：2018-11-20| 提 供 商 | 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 13.5KB |
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作為一名細(xì)胞的研究人員,，大家都應(yīng)該清楚,，細(xì)胞株的培養(yǎng)重要的條件是，怕被細(xì)菌污染,，所以做好細(xì)胞株的無菌工作,，是細(xì)胞株培養(yǎng)的重中之重,。
下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點(diǎn)：
1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無菌室和無菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘*滅菌,，用70%ethanol擦拭無菌操作臺(tái)面,，并且打開無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,。每次操作只能處理一株細(xì)胞株,，即使培養(yǎng)基*相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆,。實(shí)驗(yàn)完成后,，請將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺(tái)面,。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后,，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。
2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞,，必要物品（試管架,、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置,，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出,，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺(tái)內(nèi),。實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)在臺(tái)面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成,，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作,。
3. 小心取用無菌實(shí)驗(yàn)物品,，避免細(xì)菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處,，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作,。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身,，傾斜大約45°角取用,，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。
4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全,，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。對于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）,。操作過程中,，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品,，例如DMSO和TPA等,，并避免針頭的傷害等等,。
5. 定期檢測下列項(xiàng)目：
5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度,、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水,，每周定時(shí)更換）。
5.3. 無菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力,，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜,，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）,。
6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750）,，需定期更換水槽中的水。