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小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)要點(diǎn)
閱讀：142 發(fā)布時(shí)間：2018-6-15| 提 供 商 | 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 45.6KB |
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小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)要點(diǎn)
（1）間接法和夾心法
這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷,。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性,，顯色清晰者為陽性,。但在ELSIA中,，正常人血清反應(yīng)后?？沙霈F(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因試劑的組成和實(shí)驗(yàn)的條件不同而異,，因此實(shí)驗(yàn)中必須加測(cè)陰性對(duì)照,。陰性對(duì)照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷結(jié)果時(shí),，更宜用顯色深于陰性對(duì)照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo),。
目視法簡捷明了，但頗具主觀性,。在條件許可下,，應(yīng)該用比色計(jì)測(cè)定吸光值，這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù),。先讀出標(biāo)本（sample,，S）、陽性對(duì)照（P）,、和陰性對(duì)照（N）的吸光值,，然后進(jìn)行計(jì)算。計(jì)算方法有多種,，大致可分為陽性判定值法和標(biāo)本與陰性對(duì)照比值法兩類,。
a．陽性判定值
陽性判定值（cut-off value）一般為陰性對(duì)照A值加上一個(gè)特定的常數(shù),，以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。
用此法判斷結(jié)果要求實(shí)驗(yàn)條件十分恒定,，試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化,，陽性和陰性的對(duì)照品應(yīng)符合一定的規(guī)格，須配用精密的儀器,，并嚴(yán)格按規(guī)定操作,。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對(duì)大量標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)而得到的。現(xiàn)舉某種檢測(cè)HBsAg的試劑盒為例,。試劑盒中的陰性對(duì)照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿,，陽性對(duì)照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照,。測(cè)得A值后,，先計(jì)算陰性對(duì)照A值的平均數(shù)（NCX）和陽性對(duì)照A值的平均數(shù)（PCX），兩個(gè)平均數(shù)的差（P-N）必須大于一個(gè)特定的數(shù)值（例0.400）,，試驗(yàn)才有效,。3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX,，如其中之一超出此范圍,，則棄去，而已另兩個(gè)陰性對(duì)照重新計(jì)算NCX,；如有兩個(gè)陰性對(duì)照A值超出以上范圍,，則該次實(shí)驗(yàn)無效。陽性判定值按下式計(jì)算：陽性判定值=NCX+0.05,，標(biāo)本A值＞陽性判定值的為陽性,，小于陽性判定值的為陰性。應(yīng)注意的是,，式中0.05為該試劑盒的常數(shù),，只適合于該特定條件下，而不是對(duì)各種試劑均可通用,。
根據(jù)以上敘述可以看出,，在這種方法中陰性對(duì)照和陽性對(duì)照也起到試驗(yàn)的質(zhì)控作用，試劑變質(zhì)和操作不當(dāng)均會(huì)產(chǎn)生"試驗(yàn)無效"的后果,。
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