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       BCA（Bicinchoninic Acid）法是一種常用的蛋白定量檢測方法,，其原理是利用蛋白質(zhì)與銅離子在堿性溶液中發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，生成穩(wěn)定的紫紅色復合物,，再與標準曲線比較,，即可求出待測蛋白的濃度。該方法具有靈敏度高,、準確度高,、操作簡便、抗干擾能力強等優(yōu)點,，廣泛應(yīng)用于生物化學等領(lǐng)域,。

實驗步驟：

1.試劑準備

（1）BCA工作液：將BCA試劑A和B按50:1的比例混合，充分搖勻,，備用,。

（2）標準蛋白溶液：取適量的標準蛋白，用PBS或去離子水溶解,，配制成濃度為1mg/mL的標準蛋白溶液,。

2.蛋白樣品制備

（1）細胞裂解：將細胞樣品離心，去除上清液,，加入適量的細胞裂解液,，在冰上裂解30min，使細胞充分裂解,。

（2）去除雜質(zhì)：將裂解后的樣品離心,，去除沉淀，保留上清液,。在上清液中加入適量的SDS,，使終濃度為0.1%，充分混勻,。

（3）標準曲線制備：取適量的標準蛋白溶液,，加入適量的SDS,，使終濃度為0.1%，然后分別稀釋成不同濃度的標準蛋白溶液,。取96孔板,，分別加入不同濃度的標準蛋白溶液，每個濃度設(shè)3個復孔,。在每個孔中加入BCA工作液,，充分混勻。然后按照說明書要求,，在特定波長下測量吸光度值,，繪制標準曲線。

3.蛋白定量檢測

（1）取適量的待測蛋白樣品,，加入適量的SDS,，使終濃度為0.1%，充分混勻,。然后按照標準曲線的制備方法,，加入BCA工作液，測量吸光度值,。

（2）根據(jù)標準曲線,，查找出待測蛋白樣品的濃度。如果待測蛋白樣品濃度較高,，可以進行適當稀釋后再進行測定,。

注意事項：

1.BCA工作液應(yīng)儲存于4℃避光保存，避免反復凍融,。

2.實驗過程中應(yīng)保持樣品和標準蛋白溶液的pH值一致,，以保證結(jié)果的準確性。

3.在實驗過程中應(yīng)避免交叉污染,，以免影響實驗結(jié)果,。

4.對于一些特殊的蛋白質(zhì)樣品，可能需要采用其他方法進行定量檢測,。