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PCR基因擴增儀應(yīng)用詳細說明
閱讀：242 發(fā)布時間：2024-12-3一、原理
PCR技術(shù)的本質(zhì)是體外核酸擴增，加熱使雙鏈DNA解開螺旋,，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交，在Taq DNA聚合酶,，dNTPs,，Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物，重復(fù) “變性→退火→引物延伸"過程至25～40個循環(huán),，呈指數(shù)級擴大待測樣本中的核酸拷貝數(shù),。
二、分類
1. 普通的PCR儀
一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,，又叫傳統(tǒng)的PCR儀,。
用途：主要是做一些簡單的,、對單一退火溫度的目的基因進行擴增,。
（1）梯度PCR儀： 一次PCR擴增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),，通常為12種溫度梯度的普通PCR儀,。
用途：研究未知DNA退火溫度的擴增。
?。?）原位PCR：將具有細胞定位能力的原位雜交技術(shù)運用于從細胞內(nèi)靶DNA的定位分析,，在細胞內(nèi)實現(xiàn)基因擴增的普通PCR儀。
用途：用于在細胞的靶DNA所在位置上進行基因擴增,。
2. 實時熒光定量PCR儀
PCR擴增時加入的引物利用熒光素進行標記,，使引物和熒光探針同時與模板進行特異性結(jié)合，擴增結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號并輸送到計算機分析處理系統(tǒng),，實時輸出量化結(jié)果,，這樣的PCR儀叫實時熒光定量PCR儀。
?。?）金屬板式實時定量PCR儀
可作為普通PCR儀使用
可帶梯度功能
可容納的樣本量大,，無需特殊耗材
溫度均一性欠佳，有邊緣效應(yīng),，標準曲線的反應(yīng)條件難以做到與樣品全一致
?。?）離心式實時定量PCR儀
溫度均一性較好
使用的是同一個激發(fā)光源和檢測器，隨時檢測旋轉(zhuǎn)到跟前的樣品,，有效減少系統(tǒng)誤差
可容納樣品量少,，有的需用特殊毛細管作樣品管,，增加了使用成本，也不帶梯度功能
?。?）各孔獨立控溫的定量PCR儀
不同樣品槽分別擁有獨立的智能升降溫模塊,，各孔獨立控溫，適合多指標快速檢測,。
SmartCyclerⅡ的軟件允許一臺儀器同時操作六個樣品模塊,，既滿足高速批量要求，又能靈活運用,，還可實現(xiàn)任意梯度反應(yīng),。
SmartCyclerⅡ上樣不如傳統(tǒng)方法方便，而且需要有的扁平反應(yīng)管,，使用成本較高,。
三、操作規(guī)程
普通PCR擴增儀的操作非常簡便,，接通電源,，儀器自檢，設(shè)置溫度程序或調(diào)出儲存的程序運行即可,。
定量PCR擴增儀的操作和普通PCR儀基本相同,。
四、常見故障
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②PCR管融化,，原因可能是溫度傳感器出問題或是熱蓋出問題,；
③個別孔擴增效率差異很大,，可能的原因是半導(dǎo)體模塊出現(xiàn)壞點,；
④熒光強度減弱或不穩(wěn)定,，產(chǎn)生的原因有濾光片發(fā)霉或有水汽,，或光源損耗（以鹵鎢燈為光源的），需更換光源,；或需調(diào)節(jié)檢測元件靈敏度,；
⑤儀器工作時出現(xiàn)噪音,。
以上故障部分可自行檢查,，部分需工程師檢修。