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ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實驗）測定結(jié)果計算方法
閱讀：162 發(fā)布時間：2024-8-19ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實驗）是一種常用的生物化學(xué)分析技術(shù),，用于檢測特定蛋白質(zhì)或其他生物分子的存在和濃度,，ELISA 數(shù)據(jù)分析和結(jié)果解讀是實驗過程中至關(guān)重要的一步,。ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法：例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit,、酶聯(lián)免疫試劑盒,、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒,、酶免試劑盒等,，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等,。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,，得到世界科研工作者的認(rèn)可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣,，尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展,。ELISA生物試驗是一種敏感性高，特異性強,，重復(fù)性好的實驗診斷方法,。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,，操作簡便,，結(jié)果判斷較客觀等因素,，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中,。
在 ELSIA中，正常人血清反應(yīng)后常可出現(xiàn)呈色的本底,，此本底的深淺因試劑的組成和實驗的條件不同而異,，因此實驗中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物,。在用肉眼判斷結(jié)果時,，更宜用顯色深于陰性對照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。目視法簡捷明了,，但頗具主觀性,。在條件許可下，應(yīng)該用比色計測定吸光值,，這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù),。先讀出標(biāo)本（sample，S）,、陽性對照（P）,、和陰性對照（N）的吸光值，然后進行計算,。計算方法有多種,，大致可分為陽性判定值法和標(biāo)本與陰性對照比值法兩類。
1. 陽性判定值
陽性判定值（cut-off value）一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù),，以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn),。
用此法判斷結(jié)果要求實驗條件十分恒定，試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化,，陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一定的規(guī)格,，須配用精密的儀器，并嚴(yán)格按規(guī)定操作,。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標(biāo)本的實驗檢測而得到的?，F(xiàn)舉某種檢測 HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿,，陽性對照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng /ml,。每次試驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后,，先計算陰性對照A值的平均數(shù)（NC X ）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX）,，兩個平均數(shù)的差（P-N）必須大于一個特定的數(shù)值（例0.400），試驗才有效,。3個陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX,，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍,，則棄去,，而已另兩個陰性對照重新計算NCX,；如有兩個陰性對照A值超出以上范圍，則該次實驗無效,。陽性判定值按下式計算：
陽性判定值=NCX+0.05
標(biāo)本 A值＞陽性判定值的為陽性,，小于陽性判定值的為陰性。應(yīng)注意的是,，式中0.05為該試劑盒的常數(shù),，只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用,。
根據(jù)以上敘述可以看出,，在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質(zhì)控作用，試劑變質(zhì)和操作不當(dāng)均會產(chǎn)生"試驗無效"的后果,。
2. 標(biāo)本/陰性對照比值
在實驗條件（包括試劑）較難保證恒定的情況下,，這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本（ S）和陰性對照（N）的A值后,，計算S/N值,。也有寫作P/N的，這里的P不代表陽性(positive),，而是病人（patient）的縮寫,，不應(yīng)誤解。為避免混淆,，更宜用S/N表示,。在早期的間接法ELISA中，有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準(zhǔn),，現(xiàn)多為各種測定所沿用,。實際上每一測定系統(tǒng)應(yīng)該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)注意的是,，N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清,。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多,。因此,，這類試劑盒規(guī)，如N<0.05（或其他數(shù)值）,，則按0.05計算,，否則將出現(xiàn)假陽性結(jié)果。