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酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）樣本制備處理分述
閱讀：100 發(fā)布時(shí)間：2024-8-12 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,，ELISA）是免疫學(xué)和分子生物學(xué)中廣泛使用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù),，能夠應(yīng)用 ELISA 實(shí)驗(yàn)的樣本種類很多,，有血清,，血漿,，細(xì)胞上清,，細(xì)胞裂解液
一,、血清
1,、將全血收集到未經(jīng)處理的測(cè)試管中，或者到不含抗凝劑的管中,，如 BD 血清用真空采血管,。
2、在室溫下連續(xù)孵育 20 分鐘,。
3,、4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘。
4,、立即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品,。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù),。
二、血漿
1,、將全血收集到含抗凝劑的管中,，例如 BD 抗凝真空采血管（目錄號(hào)：363080/363080）或添加 0.1M 檸檬酸鈉至 1/10 終體積。
2,、4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘,。
3、立即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品,。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù),。
三、細(xì)胞培養(yǎng)物上清液
1,、將培養(yǎng)基移至離心管,， 4℃， 1,500 rpm 離心 10 分鐘,。
2,、立即進(jìn)行上清液的分裝（血清）并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)
四,、細(xì)胞提取物
1,、將組織培養(yǎng)板放置在冰上。
2,、吸出培養(yǎng)基并用預(yù)冷PBS 輕輕洗滌細(xì)胞一次,。
3、吸出 PBS ,，加入100 mm 培養(yǎng)板加入0.5ml*提取緩沖液,。
4、收集細(xì)胞至在傾斜板中,，然后移至經(jīng)過預(yù)冷的離心管中,。
5、短暫渦旋后在冰上孵育 15-30 分鐘,。
6,、在 4℃ 下13,000 x rpm 離心 10 分鐘，沉淀不溶性內(nèi)容物,。
7,、將上清液（這里是指可溶性細(xì)胞提取物）分裝至預(yù)冷的離心管中，并于 -80℃ 保存,。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù),。
五、條件培養(yǎng)基
1、將細(xì)胞接種到*（含血清）生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,，使細(xì)胞增殖達(dá)到一定的融合率,。
2、棄去培養(yǎng)基,，數(shù)毫升預(yù)熱PBS 小心洗滌,。重復(fù)洗滌步驟。
3,、棄去PBS 洗滌液并小心加入無血清培養(yǎng)基,。
4、孵育 1-2 天,。
5,、將培養(yǎng)基移至離心管， 4℃ 1,500 rpm 離心 10 分鐘,。
6,、立即分裝上清液（血清）并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù),。
六、乳汁
1,、收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘,。
2、分裝上清液并在 -80℃ 下保存樣品,。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù),。
七、尿液
1,、收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘,。
2、等分上清液（血清）并在 -80℃ 下保存樣品,。盡可能減少凍融循環(huán)次數(shù)
八,、唾液
1、收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘,。
2,、立即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù),。
九,、組織提取物
1、用干凈的工具解剖組織,，最好在冰上,、盡快進(jìn)行，以防止被蛋白酶降解。
2,、將組織置于圓底的微量離心管中,，并浸入液氮中進(jìn)行“速凍"。將樣品保存在 -80℃ 下以便后續(xù)使用或放置在冰上進(jìn)行直接勻漿,。
3,、對(duì)于約 5 mg 的組織片，可向管中添加約 300 µl *提取緩沖液（查看細(xì)胞/組織提取緩沖液配方）,，然后用電動(dòng)勻漿器勻漿,。
4、清洗刀片兩次,，每次清洗使用 300µl *提取緩沖液,，然后在 4℃ 下維持恒定攪拌 2 小時(shí)（例如置于冷室中的回旋振蕩器上）。
5,、 4℃ 13,000 x rpm 離心 20 分鐘,。置于冰上，將上清液（這里是指可溶的蛋白質(zhì)提取物）分裝至新,、預(yù)冷的管中并在 -80℃ 下保存樣品,。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。