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實際篩選血清方式推送
閱讀：135 發(fā)布時間：2024-6-3細(xì)胞培養(yǎng)液中添加的血清有牛血清,、馬血清,、人血清等，其中牛血清是常用的血清,，分為胎牛血清和新生小牛血清,。胎牛血清是從母牛破腹取出的胎牛中分離出的血清，價格昂貴,。新生小牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來的血清,，如廠家能做到這一點,，新生小牛血清的質(zhì)量與胎牛血清的質(zhì)量相差不大。如小牛出生后已哺乳,，從這種小牛中取出的血清中可能含有較多的生物活性物質(zhì),，其質(zhì)量明顯不如前兩種。血清,，指血液凝固后,，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。
細(xì)胞培養(yǎng)中血清的主要作用事項如下：
1. 提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素,，特別是基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,，還包括一些主要的低分子營養(yǎng)物；
2. 提供結(jié)合蛋白,，能識別維生素,、脂類、金屬和其他激素等,，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力,；
3. 血清中含有一些微量元素，有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,，起到解毒作用,；
4. 細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源,；
5. 血清蛋白形成了血清的粘度,，可以保護細(xì)胞免受機械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時,，粘度起到重要作用,；
6. 抑制蛋白酶的作用,，在貼壁細(xì)胞傳代時可將剩余胰蛋白酶失活,，從而保護細(xì)胞。
雖然我們對血清的功能清楚,，但血清的成份非常復(fù)雜,，時至今日對其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機制仍不清楚,，尤其是對其中一些多肽類生長因子,、激素和脂類等尚未充分認(rèn)識；其次血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,，而且血清保存期至多一年,，因此，要保證每批血清的相似性極為困難,，在細(xì)胞培養(yǎng)中避免不了要做血清篩選,。
在實際篩選時,，主要從血清外觀和實驗操作時細(xì)胞的生長狀態(tài)進行。
從外觀上：
1. 顏色：
根據(jù)血紅蛋白含量的不同,，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,，這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度。胎牛血清或多或少總有點溶血,，因為胎牛血清凝血功能差,，紅細(xì)胞容易破裂；
2. 澄清度：
高質(zhì)量的胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低,，表現(xiàn)為稀薄,、清淡；
3. 血清沉淀：
血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生,，對血清質(zhì)量沒有影響,，沉淀的產(chǎn)生原因跟加工生產(chǎn)方式、是否反復(fù)凍融密切相關(guān),，在實驗操作中可能會對細(xì)胞觀察產(chǎn)生影響,。
從性能上：
1. 細(xì)胞形態(tài)，在進行血清篩選時首先觀察細(xì)胞的生長形態(tài)是否產(chǎn)生明顯變化,，以及觀察貼壁細(xì)胞的貼壁情況,，細(xì)胞在不同血清培養(yǎng)中可能會出現(xiàn)形態(tài)上的差異；
2. 倍增時間,，一般情況下會選擇倍增時間短的血清,，值得注意的是血清的影響會傳至5代，在進行測試時,，最好培養(yǎng)五代后進行計倍增時間的計算,；
3. 克隆形成率，測試時一般選50,、100,、200個細(xì)胞進行平板克隆測試，平均5d左右換一次液,，兩周后染色計數(shù),，對比克隆形成情況。
血清的質(zhì)量,，種類及使用的濃度都有可能影響細(xì)胞的生長,，而不同批次的血清支持細(xì)胞生長的能力也不同，尤其是對克隆細(xì)胞的生長,，某些批次血清可能含有毒性或抑制細(xì)胞生長的物質(zhì),。因此，在購買大量血清之前,，必須對血清支持細(xì)胞生長能力進行檢測,，然后再大量購買質(zhì)量好的同一批號的血清,。
注意事項：
1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ – 70℃ 低溫冰箱中,。4℃冰箱中保存時間切勿超過1 個月,。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10％，因此,，血清在凍入低溫冰箱前,，必須預(yù)留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂,。
2,、一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾除菌,。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,，則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾，切勿直接過濾血清,。
3,、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法：-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室溫,，待全部溶解后再分裝,。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一,，減少沉淀的發(fā)生,。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍，這樣因溫度改變太大,，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀,。
4、熱滅活是指56℃, 30 分鐘加熱已全解凍的血清,。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻,。此熱處理的目的是使血清中的補體成分（complement）滅活。除非必須,，一般不建議作此熱處理,，因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多，而且還會影響血清的質(zhì)量,。補體參與反應(yīng)有：細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。
5,、切勿將血清在37℃放置太久,，否則血清會變得渾濁，同時血清中的有效成分會破會而影響血清質(zhì)量,。
6,、血清中的沉淀物絮狀物：主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,，這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量?？捎秒x心3000rpm, 5 分鐘去除,，也可不用處理。
顯微鏡下“小黑點"：經(jīng)過熱處理過的血清,，沉淀物的形成會顯著增多,。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象“小黑點"，常誤認(rèn)為血清受污染,。一般情況下,，此小黑點不會影響細(xì)胞生長，但如果懷疑血清質(zhì)量,，則應(yīng)立即停止使用,，更換另一批號的血清。