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胎牛血清白蛋白(BSA)獲取途徑及其用途
閱讀:205 發(fā)布時間:2024-5-20胎牛血清白蛋白,,英文名稱Bovine Serum Albumin(BSA),,也稱Cohn Fraction V,是牛血清中的一種白蛋白,,包含583個氨基酸殘基,,分子量為66.430 kDa,等電點為4.7,。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用,,例如在western blot中作為Blocking agent;在酶切反應(yīng)緩沖液中加入BSA,通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度,,對酶起保護作用,。防止酶的分解和非特異性吸附,能減輕有些酶的變性,,能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱,,表面張力及化學因素引起的變性。是胎牛血清中的一種球蛋白,,一般獲取胎牛血清白蛋白,常常運用的方法是加熱法,。
下面一起來看看獲取胎牛血清白蛋白的,。
一、所需材料
胎牛血清以檸檬酸三鈉為抗凝劑,,血液搜集后隨即分別出血漿備用,。需要的試劑有血清白蛋白;溴jia酚氯,;醋酸纖維素薄膜,,別的試劑均為分析純。獲取胎牛血清白蛋白需要準備 LG-6型大容量冷凍離心機,,DF-C型電泳儀,,UV-754型紫外可見分光光度計,PHS-2型酸度計,。
二,、具體方法
白蛋白含量測定 選用溴jia酚氯法,以胎牛血清白蛋白為規(guī)范. 白蛋白純度的測定 選用醋酸纖維素薄膜電泳法,。吸光度值的測定 用分光光度計直接測定蛋白質(zhì)溶液在波長為403 nm處的光吸收值,,然后折算成濃度為10 g/L時牛血清白蛋白的光吸收值,用A403表明,。
胎牛血清白蛋白的生產(chǎn)工藝 新鮮抗凝牛血用LC-6型大容量離心機(3 000 r/min×30 min)離心分別出血漿,,加一定量的蒸餾水稀釋,再參與恰當?shù)姆€(wěn)定劑和蛋白沉淀劑,然后按下述方法進行試驗處理:
1.不一樣pH值溶液對白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在其它條件固定的情況下,,試驗不一樣pH值對白蛋白的收率,、純度及A403值的影響。
2.不一樣加熱保溫時間對白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在選定的pH值和其它條件固定的情況下,,試驗不一樣加熱保溫時間對白蛋白的收率,、純度及A403值的影響。
3.不一樣稀釋倍數(shù)對白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在選定的pH值和保溫時間及其它條件固定的情況下,,試驗不一樣稀釋倍數(shù)對白蛋白的收率,、純度及A403值的影響。
4.不一樣加熱溫度對白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在其它條件選定的情況下,,試驗不一樣加熱溫度對白蛋白的收率,、純度及A403值的影響。
牛血清白蛋白BSA有著J其廣泛的實驗室應(yīng)用,,除在細胞培養(yǎng)中作為營養(yǎng)物添加外,,牛血清白蛋白BSA主要還有以下用途:
1. 在酶切反應(yīng)體系中作穩(wěn)定劑,對酶起保護作用,,并防止其分解和非特異性吸附,;
2. 維持滲透壓、提供pH緩沖,、起載體作用,;
3. 作為蛋白定量檢測的標準品使用,如WB中的蛋白定量等,;
4. 常規(guī)免疫實驗中作封閉試劑使用,,包括ELISA、WB和IHC等,。
WB常規(guī)使用含蛋白比較全的脫脂奶粉來封閉,,一般檢測磷酸化蛋白時更推薦用BSA(脫脂奶粉含有磷酸化蛋白可能會有干擾);常規(guī)方法封閉效果不佳時也可考慮使用BSA封閉以進行優(yōu)化,。