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胎牛血清白蛋白（BSA）獲取途徑及其用途
閱讀：117 發(fā)布時間：2024-5-20胎牛血清白蛋白,，英文名稱Bovine Serum Albumin（BSA）,，也稱Cohn Fraction V，是牛血清中的一種白蛋白,，包含583個氨基酸殘基,，分子量為66.430 kDa，等電點為4.7,。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用,，例如在western blot中作為Blocking agent;在酶切反應緩沖液中加入BSA，通過提高溶液中蛋白質的濃度,，對酶起保護作用,。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性,，能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱,，表面張力及化學因素引起的變性,。是胎牛血清中的一種球蛋白，一般獲取胎牛血清白蛋白,，常常運用的方法是加熱法,。
下面一起來看看獲取胎牛血清白蛋白的。
一,、所需材料
胎牛血清以檸檬酸三鈉為抗凝劑,，血液搜集后隨即分別出血漿備用。需要的試劑有血清白蛋白,；溴jia酚氯,；醋酸纖維素薄膜，別的試劑均為分析純,。獲取胎牛血清白蛋白需要準備 LG-6型大容量冷凍離心機,，DF-C型電泳儀，UV-754型紫外可見分光光度計,，PHS-2型酸度計,。
二、具體方法
白蛋白含量測定 選用溴jia酚氯法,，以胎牛血清白蛋白為規(guī)范. 白蛋白純度的測定 選用醋酸纖維素薄膜電泳法,。吸光度值的測定 用分光光度計直接測定蛋白質溶液在波長為403 nm處的光吸收值，然后折算成濃度為10 g/L時牛血清白蛋白的光吸收值,，用A403表明,。
胎牛血清白蛋白的生產工藝 新鮮抗凝牛血用LC-6型大容量離心機(3 000 r/min×30 min)離心分別出血漿，加一定量的蒸餾水稀釋,，再參與恰當?shù)姆€(wěn)定劑和蛋白沉淀劑,，然后按下述方法進行試驗處理：
1.不一樣pH值溶液對白蛋白的收率和質量的影響 在其它條件固定的情況下，試驗不一樣pH值對白蛋白的收率,、純度及A403值的影響,。
2.不一樣加熱保溫時間對白蛋白的收率和質量的影響 在選定的pH值和其它條件固定的情況下，試驗不一樣加熱保溫時間對白蛋白的收率,、純度及A403值的影響,。
3.不一樣稀釋倍數(shù)對白蛋白的收率和質量的影響 在選定的pH值和保溫時間及其它條件固定的情況下，試驗不一樣稀釋倍數(shù)對白蛋白的收率,、純度及A403值的影響,。
4.不一樣加熱溫度對白蛋白的收率和質量的影響 在其它條件選定的情況下,，試驗不一樣加熱溫度對白蛋白的收率,、純度及A403值的影響。
牛血清白蛋白BSA有著J其廣泛的實驗室應用,，除在細胞培養(yǎng)中作為營養(yǎng)物添加外,，牛血清白蛋白BSA主要還有以下用途：
1. 在酶切反應體系中作穩(wěn)定劑,，對酶起保護作用，并防止其分解和非特異性吸附,；
2. 維持滲透壓,、提供pH緩沖、起載體作用,；
3. 作為蛋白定量檢測的標準品使用,，如WB中的蛋白定量等；
4. 常規(guī)免疫實驗中作封閉試劑使用,，包括ELISA,、WB和IHC等。
WB常規(guī)使用含蛋白比較全的脫脂奶粉來封閉,，一般檢測磷酸化蛋白時更推薦用BSA（脫脂奶粉含有磷酸化蛋白可能會有干擾）,；常規(guī)方法封閉效果不佳時也可考慮使用BSA封閉以進行優(yōu)化。