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血清的儲存與應(yīng)用探究
閱讀：112 發(fā)布時間：2024-3-18血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物,，其組成成份雖大部分已知,，但還有一部分尚不清楚,，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡,、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異,。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度,、滲透壓等作用,。實驗室準確的應(yīng)用及保存血清，才能使血清施展應(yīng)有的效果,。
一,、血清儲存：
1.應(yīng)用前處理:大部分血清在應(yīng)用前必需滅活處置，即560C30分鐘,。滅活的目標是去除血清中的補體身分,，防止補體對細胞發(fā)生毒性同化。血清顛末滅活也會喪失一些對細胞無利的成分,，如發(fā)展因子,，是以也有人提出血清不經(jīng)滅活間接用于造就，這樣做的前提是確認血清中不含補體身分,。對付一些品德高的胎牛血清和新牛血清能夠斟酌不經(jīng)滅活間接用于細胞造就,。
2.應(yīng)用濃度:自從有了分解造就基，血清便是作為一種增加身分與分解造就基混雜應(yīng)用,，應(yīng)用濃度一樣平常為5-20},，最罕用是10}。過量血清容易使造就中的細胞發(fā)生變更,，特別是一些二倍體的無窮細胞系,，敏捷發(fā)展以后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。
3.貯存條件:血清一樣平常貯存于一200C,，同時應(yīng)防止重復(fù)凍融,。購置大包裝的血清后，首先要滅活處置,，而后分裝成小包裝,，貯存于一200C，應(yīng)用前熔化,。熔化時最好現(xiàn)置于40C,。熔化后的血清在40C不宜長期寄存，應(yīng)盡快應(yīng)用,。
4.選購血清時,，先從供應(yīng)商處討取樣品停止實驗,，選定一批后就要保存充足應(yīng)用6個月至1年的量,，直至用另一批顛末事后實驗的樣品取代,。
二、血清的解凍：
當(dāng)血清需要被解凍時,，我們不建議大家把剛從-20℃中拿出的冰凍血清,，直接放入4℃冰箱中過夜融化，也不要在室溫進行過夜解凍,。
由于血清含有蛋白質(zhì)等干物質(zhì),，這類物質(zhì)容易先融化析出，水這類溶劑后融化,，導(dǎo)致血清產(chǎn)生沉淀,，影響使用效果。
因此,，要盡可能保證所有成分同步融化,，因此我們建議使用三步法融化。
需要注意的是,，如果血清是儲存在-80℃冰箱中,，三步法解凍前，應(yīng)先將血清轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中存放1-2天,。
一次解凍后,，分裝至無菌離心管中，盡量保證每管是一次的用量,，分裝管解凍也遵循三步法,，解凍后需全部用完。
三,、血清的應(yīng)用：
1,、血清的熱滅活：
血清進行熱滅活的目的是，利用較高的溫度使補體失活,。由于胎牛血清會嚴格控制采血時間為5-8月齡的胎牛,，此時還未形成完整的補體系統(tǒng)，因此,，合格的胎牛血清,，是不需要滅活的。
但是實驗中如果需要新生牛血清,、小牛血清,、豬血清或馬血清這些血清時，則需要根據(jù)實驗要求而定,。
根據(jù)血清廠家多年來總結(jié)的經(jīng)驗,，常規(guī)解凍后，40℃水浴加熱20分鐘即可,，能夠盡可能地保留營養(yǎng)成分,。
2,、細胞培養(yǎng)的應(yīng)用：
對于新的細胞系或從無血清培養(yǎng)轉(zhuǎn)變到胎牛血清培養(yǎng)的細胞系，需要進行適應(yīng)期,。在初始適應(yīng)期,，可以將血清濃度逐漸降低，直到細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)為止,。
3,、關(guān)注血清的批次：
相同品牌的胎牛血清，在蛋白質(zhì)含量等方面,，可能會存在批次差異,，因此在同一實驗中最好使用來自同一批次的血清，以減少變異性,。如果不得不使用不同批次的胎牛血清,，請進行驗證實驗以確保結(jié)果的可重復(fù)性。