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傳代培養(yǎng)操作步驟及注意事項(xiàng)
閱讀：151 發(fā)布時(shí)間：2023-11-13 原代細(xì)胞培養(yǎng)成功以后,，需要進(jìn)行分離培養(yǎng),，否則細(xì)胞會(huì)因生存空間不足或密度過大，營(yíng)養(yǎng)障礙,，影響細(xì)胞生長(zhǎng),。細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細(xì)胞允許培養(yǎng)的細(xì)胞擴(kuò)增(形成細(xì)胞株),，可以進(jìn)行細(xì)胞克隆,，易于保存，但可能喪失一些特殊的細(xì)胞和分化特征,。傳代細(xì)胞形成細(xì)胞株的最大利處在于提供了大量持久的實(shí)驗(yàn)材料,，便于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞株也是可以購(gòu)買的,。
1,、操作步驟：
（1）,、吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。
（2）,、向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量,。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜。
（3）,、置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進(jìn)行消化,，2~5min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮,、細(xì)胞間隙增大后,，應(yīng)立即中止消化。
（4）,、吸出消化液,，向瓶?jī)?nèi)加入Hanks液少量，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶,，把殘留消化液沖掉,，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化,，在吸除胰蛋白液后,，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化,。
（5）,、使用彎頭吸管，吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液,，按順序反復(fù)輕輕吹打瓶壁細(xì)胞,，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔,，以防用力過猛損傷細(xì)胞,。
（6）、用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后,，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中,，置CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
（7）,、細(xì)胞培養(yǎng)換液時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)要求來確定。一般2～3d后應(yīng)換一次生長(zhǎng)液,。待細(xì)胞鋪滿器皿底面,，即可使用；也可繼續(xù)傳代擴(kuò)大培養(yǎng)或換成維持液,。
2,、注意事項(xiàng)：
（1）、掌握好細(xì)胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過短時(shí),，細(xì)胞不宜從瓶壁脫落,，過長(zhǎng)的消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落、損傷,。
（2）,、掌握好消化濃度，當(dāng)消化液濃度過高時(shí),，消化時(shí)間應(yīng)縮短,，過低時(shí)細(xì)胞消化時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)。