化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
細(xì)胞培養(yǎng)的一般過(guò)程科普
閱讀：361 發(fā)布時(shí)間：2023-9-11細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無(wú)菌、適宜溫度,、酸堿度和一定營(yíng)養(yǎng)條件等）,，使之生存、生長(zhǎng),、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法,。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),。細(xì)胞培養(yǎng)的一般過(guò)程如下：
一,、準(zhǔn)備工作
準(zhǔn)備工作對(duì)開(kāi)展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大,，應(yīng)給予足夠的重視,，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無(wú)法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗,、干燥與消毒,，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,，無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒,，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。
二,、取材
在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過(guò)一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中,，這一過(guò)程稱為取材,。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無(wú)取材這一過(guò)程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的首ci 培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng),。
理論上講各種動(dòng)物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng),，實(shí)際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個(gè)體的組織容易培養(yǎng),，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng)，腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng),。取材后應(yīng)立即處理,，盡快培養(yǎng)，因故不能馬上培養(yǎng)時(shí),，可將組織塊切成黃豆般大的小塊,，置4℃的培養(yǎng)液中保存。取組織時(shí)應(yīng)嚴(yán)格保持無(wú)菌,，同時(shí)也要避免接觸其他的有害物質(zhì),。取病理組織和皮膚及消化道上皮細(xì)胞時(shí)容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理,。
三,、培養(yǎng)
將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過(guò)程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng),，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部,，幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基,。如系細(xì)胞培養(yǎng),，一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，按要求以一定的量（以每毫升細(xì)胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基,。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后,，立即放入培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長(zhǎng)狀態(tài),。
正在培養(yǎng)中的細(xì)胞應(yīng)每隔一定時(shí)間觀察一次,，觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長(zhǎng)良好，形態(tài)是否正常,，有無(wú)污染,，培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對(duì)培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時(shí)檢查,。
原代培養(yǎng)一般有一段潛伏期（數(shù)小時(shí)到數(shù)十天不等）,，在潛伏期細(xì)胞一般不分裂，但可貼壁和游走,。過(guò)了潛伏期后細(xì)胞進(jìn)入旺盛的分裂生長(zhǎng)期,。細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底后要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，將一瓶中的細(xì)胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng),。每傳代一次稱為“一代",。二倍體細(xì)胞一般只能傳幾十代，而轉(zhuǎn)化細(xì)胞系或細(xì)胞株則可無(wú)限地傳代下去。轉(zhuǎn)化細(xì)胞可能具有惡性性質(zhì),，也可能僅有不死性（Immortality）而無(wú)惡性,。
四、凍存及復(fù)蘇
為了保存細(xì)胞,，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株,，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃,，將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基,，以一定的冷卻速度凍存，最終保存于液氮中,。在極低的溫度下,，細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無(wú)限的。復(fù)蘇一般采用快融方法,，即從液氮中取出凍存管后,，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解,。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng),。
凍存過(guò)程中保護(hù)劑的選用、細(xì)胞密度,、降溫速度及復(fù)蘇時(shí)溫度,、融化速度等都對(duì)細(xì)胞活力有影響,。
五,、常用儀器設(shè)備
無(wú)菌室,超凈工作臺(tái),三重純水蒸餾器,抽氣泵,壓力蒸氣消毒器,電熱恒溫培養(yǎng)箱,培養(yǎng)器具，CO2培養(yǎng)箱,恒溫水浴鍋,倒置顯微鏡,離心機(jī),無(wú)菌過(guò)濾器,洗刷裝置,細(xì)胞計(jì)數(shù)板和電子細(xì)胞技術(shù)儀等等,。