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血清使用實(shí)驗(yàn)人必看注意事項(xiàng)
閱讀:143 發(fā)布時(shí)間:2023-8-1細(xì)胞培養(yǎng)液中添加的血清有牛血清、馬血清,、人血清等,,其中牛血清是zui 常用的血清,分為胎牛血清和新生小牛血清,。胎牛血清是從母牛破腹取出的胎牛中分離出的血清,價(jià)格昂貴,。新生小牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來(lái)的血清,,如廠家能做到這一點(diǎn),新生小牛血清的質(zhì)量與胎牛血清的質(zhì)量相差不大,。如小牛出生后已哺乳,,從這種小牛中取出的血清中可能含有較多的生物活性物質(zhì),其質(zhì)量明顯不如前兩種,。
血清的質(zhì)量,,種類及使用的濃度都有可能影響細(xì)胞的生長(zhǎng),而不同批次的血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力也不同,,尤其是對(duì)克隆細(xì)胞的生長(zhǎng),,某些批次血清可能含有毒性或抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的物質(zhì)。因此,,在購(gòu)買大量血清之前,,必須對(duì)血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)能力進(jìn)行檢測(cè),然后再大量購(gòu)買質(zhì)量好的同一批號(hào)的血清,并注意以下幾點(diǎn):
1,、需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃ – 70℃ 低溫冰箱中,。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1 個(gè)月。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,,因此,,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽选?/p>
2,、一般廠商提供的血清為無(wú)菌,無(wú)需再過(guò)濾除菌,。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過(guò)濾,切勿直接過(guò)濾血清,。
3,、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室溫,,待全部溶解后再分裝,。在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,,減少沉淀的發(fā)生,。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀,。
4、熱滅活是指56℃, 30 分鐘加熱已wan 全解凍的血清,。加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻,。此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活。除非必須,,一般不建議作此熱處理,,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物顯著增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量,。補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化,。
5、切勿將血清在37℃放置太久,,否則血清會(huì)變得渾濁,,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)破會(huì)而影響血清質(zhì)量。
6,、血清中的沉淀物絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量,。可用離心3000rpm, 5 分鐘去除,,也可不用處理,。
顯微鏡下“小黑點(diǎn)":經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著增多,。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象“小黑點(diǎn)",,常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下,,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,,更換另一批號(hào)的血清,。