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關(guān)于?血清熱滅活相關(guān)事項
閱讀：145 發(fā)布時間：2023-7-10血清熱滅活的步驟在1970年代就已建立,，至今成為很多實驗室的常規(guī)血清前處理步驟,；但許多先前認(rèn)為必須熱滅活的原因，卻早已經(jīng)不再成立,。至少70%的研究者對血清的滅活僅僅是因為遵照常規(guī)操作,，或者說認(rèn)為是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,，而時間則從15分鐘到60分鐘不等,，其中zui常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集,、處理,、加工工藝的提高，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立,，只有少數(shù)對血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效性和必要性,。
一、熱敏補體與熱滅活
熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì),，但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要,。專業(yè)人士曾對商業(yè)胎牛血清中的補體成分進(jìn)行測定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1,，C6僅達(dá)成年動物血清的1-3%，而其它補體成分僅有成年動物的5-50%,，至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出,。通過補體固定實驗，我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果,。即使是在未稀釋的血清中,，也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。另外,，多數(shù)實驗室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過程,，也對熱敏的補體有滅活的作用。
二,、支原體與熱滅活
在對補體滅活以外,，熱處理同時也對血清中可能存在的支原體具有滅活作用。多年以前,，450納米孔徑的濾膜被用于加工血清時,，血清中支原體的污染時有發(fā)生。針對這個問題,，CellMax使用100納米三層濾膜連續(xù)濾過技術(shù),，自從采用這項技術(shù)以及后來的40納米濾過技術(shù)之后,，我們的血清產(chǎn)品中沒有再發(fā)現(xiàn)有支原體的污染，也是使得熱滅活成為不必要的另外一個原因,。
三,、胚胎發(fā)育與熱滅活
血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化；有研究結(jié)果證實熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細(xì)胞的促粘附作用,，在用SV-BHK,、BALB-3T3、CV－1,、FS-4細(xì)胞對細(xì)胞粘附實驗中,，熱滅活對胎牛血清的影響小于對小牛血清的影響。
四,、細(xì)胞株生長與熱滅活
我們調(diào)查了熱滅活對胎牛血清以及對其中不同細(xì)胞株生長能力的影響,。通過比較11個不同細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對6個細(xì)胞株（HBAE,，MDBK,，Vero，成纖維細(xì)胞,，MRC-5）的生長帶來負(fù)面影響,，三個細(xì)胞株（FOX-NY，MDCK和CHO-K1）不受熱滅活的影響,，而只有兩個細(xì)胞株（Balb/3T3,，Sp2/0Ag14 hybrid），在熱滅活之后,，細(xì)胞生長有輕微的改善,。所以，在正常的操作下,，熱滅活通常對細(xì)胞的生長沒有明顯的促進(jìn)作用,。
五、沉淀與熱滅活
在正常操作下,，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負(fù)面的影響,，對血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生，而導(dǎo)致的沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染,。注意到這個現(xiàn)象之后,，為了驗證污染的存在，或者促進(jìn)沉淀的溶解,，許多培養(yǎng)者往往將血清放置37℃溫育,。這卻往往使情況變得更糟，血清中的蛋白進(jìn)一步的析出，為了確信血清未被污染,，進(jìn)行的鏡檢,，無菌培養(yǎng)試驗，和革蘭氏染色試驗更是浪費了實驗者大量的時間和精力,。
結(jié)論：
總之,，多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的。很多場合下,，熱滅活并不會改善細(xì)胞的生長,，卻降低了支持細(xì)胞生長的能力。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下,，其促進(jìn)的比率也是微不足道的,。另外，血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物的污染,，從而給用戶和供應(yīng)商都帶來不必要的麻煩,。我們建議，對于那些對血清進(jìn)行滅活的用戶,，需要通過試驗來證實其必要性,，確定滅活的適當(dāng)條件；在滅活過程中,，需要嚴(yán)格認(rèn)真監(jiān)測,，并選擇一個可重復(fù)的方案進(jìn)行操作。