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細(xì)胞培養(yǎng)常見的污染源歸納
閱讀：197 發(fā)布時(shí)間：2023-4-10 細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture)也叫細(xì)胞克隆技術(shù),，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)泛指所有體外培養(yǎng)，其含義是指從動(dòng)物活體體內(nèi)取出組織，于模擬體內(nèi)生理環(huán)境等特定的體內(nèi)條件下,，進(jìn)行孵育培養(yǎng)，使之生存并生長,。細(xì)胞培養(yǎng)過程很容易受到污染,。
一、常見的污染源如下：
1,、細(xì)菌：
細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形,，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,，對(duì)細(xì)胞生長影響明顯。
仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況,，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠,，壓力足夠,！尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品,，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染，一定要注意,！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象,！
可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理。
2,、霉菌：
培養(yǎng)液是清亮的,，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天,，仍清亮,，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物,，可看到明顯的菌絲,，細(xì)胞仍可生長，但時(shí)間長之后,，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差,。
用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi),，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二Na高鹽液體,可以防止霉菌污染,。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細(xì)胞暫時(shí)轉(zhuǎn)移,，采用過氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,，箱壁)。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個(gè)小時(shí),，使其蒸汽彌漫,。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細(xì)胞,。孵箱應(yīng)定期清潔(2月左右),，尤其在多雨的季節(jié)。
其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照,。
預(yù)防霉菌污染,，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌su 或放線菌su D或雙抗；但細(xì)胞一旦污染,，很難挽救,，制霉菌su或放線菌suD或雙抗都于事無補(bǔ)，建議舍棄該污染細(xì)胞,。將環(huán)境*消毒,，如果所有細(xì)胞都污染，可能是系統(tǒng)污染,，檢查一下培養(yǎng)基和器材,，如果只是個(gè)別污染，可能是操作問題,，就要注意操作,。
3、支原體：
黑色的,，多為多形,，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁，原體感染,，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測(cè),，而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去,。支原體感染細(xì)胞以后,，細(xì)胞病變不很明顯，只是慢慢si去。
用泰樂菌素,，獸用支原體病的藥,，但可用于細(xì)胞培養(yǎng)，無任何不良反應(yīng),。victoryx公司的使用時(shí)用50ug/ml DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染,。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
4,、黑膠蟲：
可以穿透濾膜,，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點(diǎn)狀,，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會(huì)太影響,，細(xì)胞還是可以用的,。常常是細(xì)胞生長狀態(tài)良好，且觀測(cè)到的運(yùn)動(dòng)物無明顯增多,，且培養(yǎng)液顏色,、透明度無明顯變化，可在同一批號(hào)的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象,。對(duì)細(xì)胞生長狀態(tài)不會(huì)有明顯影響,，在細(xì)胞增殖旺盛之后會(huì)自然消失，除更換血清外無須特殊處理,。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話,，可以增加細(xì)胞的種板密度，以提高細(xì)胞的生存率,。
5,、真菌：
一般培養(yǎng)液清亮，不變色,，鏡下有絲狀物,，有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片,，只是它很多很多的小塊很清楚,，象珊瑚狀，不象細(xì)胞碎片分不清,，慢慢的會(huì)長出很細(xì)的黑色絲狀物,。真菌生長的比較慢，不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn),，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了,，也很難救活了。
6,、原蟲：
培養(yǎng)液可輕微渾濁,，顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多,，輕微活動(dòng)，細(xì)胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,，而且細(xì)胞狀態(tài)不好,，邊緣不清楚，細(xì)胞不透亮,。他們與細(xì)胞可共生但會(huì)與細(xì)胞爭奪營養(yǎng),。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小,，細(xì)胞站優(yōu)勢(shì)所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長,，只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長，最終形成惡性循環(huán),。
二,、避免污染有效辦法：
1、孵箱應(yīng)定期用三氧機(jī)消毒或者紫外光照射,，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時(shí)孵箱內(nèi)的水應(yīng)是三蒸水,；
2、超凈臺(tái)\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素,；
3,、超凈臺(tái)的風(fēng)機(jī)不能過大，風(fēng)機(jī)到6-8格,，否則也可能能致霉菌污染,；
4、無菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后,，可用同等量的氨水噴灑中和,，約幾小時(shí)即可進(jìn)入操作。