日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

PCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶,、dNTP,、模板和Mg2+。

1、引物量： 每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol,，以zui低引物量產生所需要的結果為好,，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會,。
2,、酶及其濃度　目前有兩種Taq DNA聚合酶供應， 一種是從棲熱水生桿菌中提純的天然酶,，另一種為大腸菌合成的基因工程酶,。催化一典型的PCR反應約需酶量2.5U(指總反應體積為100ul時)，濃度過高可引起非特異性擴增,，濃度過低則合成產物量減少,。
3、dNTP的質量與濃度　dNTP的質量與濃度和PCR擴增效率有密切關系,，dNTP粉呈顆粒狀,，如保存不當易變性失去生物學活性,。dNTP溶液呈酸性,，使用時應配成高濃度后，以1M NaOH或1M Tris,。HCL的緩沖液將其PH調節(jié)到7.0～7.5,，小量分裝， -20℃冰凍保存,。多次凍融會使dNTP降解,。在PCR反應中，dNTP應為50～200umol/L,，尤其是注意4種dNTP的濃度要相等( 等摩爾配制),，如其中任何一種濃度不同于其它幾種時(偏高或偏低)，就會引起錯配,。濃度過低又會降低PCR產物的產量,。dNTP能與Mg2+結合，使游離的Mg2+濃度降低,。
4,、模板(靶基因)核酸　模板核酸的量與純化程度，是PCR成敗與否的關鍵環(huán)節(jié)之一,，傳統(tǒng)的DNA純化方法通常采用SDS和蛋白酶K來消化處理標本,。SDS的主要功能是：溶解細胞膜上的脂類與蛋白質，因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜,，并解離細胞中的核蛋白,，SDS 還能與蛋白質結合而沉淀；蛋白酶K能水解消化蛋白質，特別是與DNA結合的組蛋白,，再用有機溶劑酚與氯仿抽提掉蛋白質和其它細胞組份,，用乙醇或異丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作為模板用于PCR反應,。一般臨床檢測標本,，可采用快速簡便的方法溶解細胞，裂解病原體,，消化除去染色體的蛋白質使靶基因游離,，直接用于PCR擴增。RNA模板提取一般采用異硫氰酸胍或蛋白酶K法,，要防止RNase降解RNA,。
5、Mg2+濃度　Mg2+對PCR擴增的特異性和產量有顯著的影響,，在一般的PCR反應中,，各種dNTP濃度為200umol/L時，Mg2+濃度為1.5～2.0mmol/L為宜,。Mg2+濃度過高,，反應特異性降低，出現非特異擴增,，濃度過低會降低Taq DNA聚合酶的活性,，使反應產物減少。