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血清不穩(wěn)定原因及解決辦法參考
閱讀:187 發(fā)布時(shí)間:2023-3-6血清,,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白分離 出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿,。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì),、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白,、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷,、對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。
血清最大的劣勢就是不穩(wěn)定,,不穩(wěn)定原因如下:
1,、來源不穩(wěn)定
以胎牛血清為例,懷孕母牛在屠宰前腹部被剖開,,取出胎牛,,在低溫?zé)o菌條件下,刺破胎牛的心臟以獲取血清,。就這一條,,動(dòng)物倫理組織就可以把你攔住嘮嘮。另外,,牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家,,我國在對牛血清的質(zhì)量《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 2000》中提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求,包括蛋白質(zhì)含量,,細(xì)菌,、真菌,、支原體,、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細(xì)菌內(nèi)毒素,,細(xì)胞增殖支持等檢查,。
2、組分不穩(wěn)定
還有最讓人鬧心的,,動(dòng)物血清成分復(fù)雜,,其組分及含量常和動(dòng)物性別(公胎牛,母胎牛,,如激素),、年齡、生理狀態(tài),、營養(yǎng)條件不同而有差異,,是不是覺得特像中藥。還有,,盡管血清大部分成分是已知的,,但仍然存在不清楚的組分,所以導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)化極其困難,。所以,,不同的血清差異很大,就是同一的不同批次血清差異也很大,。
3,、用法不穩(wěn)定
實(shí)驗(yàn)習(xí)慣的不同,都可能導(dǎo)致細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不穩(wěn)定,,比如,,有人四度過夜融化,有人急性子,,直接扔進(jìn)水浴鍋,。新手拿到一瓶血清,第一個(gè)問題就是問自己,,要不要滅活,?血清同時(shí)含有內(nèi)毒素、血色素,、補(bǔ)體,、抗體等其他有害成分,影響細(xì)胞生長甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡,,對某些實(shí)驗(yàn)來說,,極為重要。
如此的不穩(wěn)定,,該怎么在實(shí)驗(yàn)過程中盡可能的解決呢,?
1,、土豪和有得選擇的實(shí)驗(yàn)室,請選擇無血清培養(yǎng)基,。
2,、不要頻繁更換血清牌子,不同血清來源,,工藝,,包裝運(yùn)輸?shù)榷加泻艽蟛町悾M量不要更換牌子,。
3,、選定品牌后,對于經(jīng)過測試過的好用的血清,,同一個(gè)批次多囤積一些,,計(jì)算本次實(shí)驗(yàn)的大概用量,然后在多加20%的儲(chǔ)備,,放在-20或-80度保存,。
4、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)建議每個(gè)人用自己的培養(yǎng)基,,PBS,,胰酶等試劑以及用具,保持實(shí)驗(yàn)條件一致性,,避免交叉污染,,別給自己添堵,也別給別人添堵,。
5,、如果實(shí)在要更換血清,先將細(xì)胞在新的血清里傳兩到三代,,適應(yīng)新的條件后,,細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn),。