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  中和抗體ELISA檢測試劑盒利用競爭法ELISA原理,，當(dāng)樣本中存在中和抗體時與刺突RBD蛋白結(jié)合,，從而阻止了RBD與預(yù)包被板底的ACE2蛋白的結(jié)合，用于病毒中和抗體的定量檢測,。

實驗步驟：

1.將100ul2 ug/ml ACE2加入至每孔,，4℃孵育過夜；

2.第二天,，50 ul稀釋好的樣本+50ul 刺突RBD蛋白混合后,，室溫孵育2h；

3.包被后,，移除孔中的ACE2蛋白,，加入稀釋好的封閉液，室溫封閉1h,；

4.移除孔中的封閉液,，用200ul wash buffer洗滌一次；

5.將孵育好的樣本+刺突RBD蛋白混合液100ul加入孔中,，37℃孵育2h,；

6.移除孔中的樣本-刺突RBD蛋白混合液，用200ul wash buffer洗滌,，洗4次,；

7.每孔中加入100ul稀釋好的HRP標記的抗兔Fc標簽二抗，37℃孵育1h（由于刺突RBD蛋白是帶有兔Fc標簽的,，所以可以備該二抗特異性識別并結(jié)合）,；

8.移除孔中的二抗，用200ul wash buffer洗滌,，洗4次,；

9.向每孔加入100ul TMB顯色液，輕輕混合,，室溫孵育5min,，每孔加入100ul終止液，輕輕混合,，在450 nm波長下檢測吸光度,。

標準曲線僅用于說明目的，不應(yīng)用于計算未知數(shù),。每次檢測時均應(yīng)做標準曲線,。

（競爭法ELISA,，微孔板中顏色的深淺與待測物的濃度呈負相關(guān)）