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  中和抗體ELISA檢測試劑盒利用競爭法ELISA原理,，當(dāng)樣本中存在中和抗體時(shí)與刺突RBD蛋白結(jié)合,，從而阻止了RBD與預(yù)包被板底的ACE2蛋白的結(jié)合，用于病毒中和抗體的定量檢測,。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.將100ul2 ug/ml ACE2加入至每孔,，4℃孵育過夜；

2.第二天,，50 ul稀釋好的樣本+50ul 刺突RBD蛋白混合后,，室溫孵育2h；

3.包被后,，移除孔中的ACE2蛋白,，加入稀釋好的封閉液，室溫封閉1h,；

4.移除孔中的封閉液,，用200ul wash buffer洗滌一次；

5.將孵育好的樣本+刺突RBD蛋白混合液100ul加入孔中,，37℃孵育2h,；

6.移除孔中的樣本-刺突RBD蛋白混合液，用200ul wash buffer洗滌,，洗4次,；

7.每孔中加入100ul稀釋好的HRP標(biāo)記的抗兔Fc標(biāo)簽二抗，37℃孵育1h（由于刺突RBD蛋白是帶有兔Fc標(biāo)簽的,，所以可以備該二抗特異性識別并結(jié)合）,；

8.移除孔中的二抗,，用200ul wash buffer洗滌，洗4次,；

9.向每孔加入100ul TMB顯色液,，輕輕混合，室溫孵育5min,，每孔加入100ul終止液,，輕輕混合，在450 nm波長下檢測吸光度,。

標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于說明目的,，不應(yīng)用于計(jì)算未知數(shù)。每次檢測時(shí)均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

（競爭法ELISA,，微孔板中顏色的深淺與待測物的濃度呈負(fù)相關(guān)）