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ELISA實驗樣本的保存與處理
閱讀：255 發(fā)布時間：2022-11-1ELISA實驗過程中除了選擇靈敏度高的ELISA試劑盒之外，處理樣本的方法也是不一樣的,。ELISA實驗中常見液體類樣本有血清,、血漿、尿液,、細(xì)胞上清,、腦脊液等幾種。
一,、ELISA樣本的保存
正常情況下,，再5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4°C，標(biāo)本再冰箱中保存時間過長會導(dǎo)致血清IgG聚合,，是間接法的試劑本底加深,，超過一周測定的需-20°C保存，凍結(jié)血清溶解后,，蛋白質(zhì)局部濃縮,，分不均,，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡，
渾濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,，澄清后再檢測,。
測抗體的血清的標(biāo)本如需保存作多次檢測，以少量分裝冰存,，
保存血清只采集是就應(yīng)注意無菌操作,，也可加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎鼓粀an全的標(biāo)本因纖維蛋白元的干擾而造成假陽性,，建議勁量不使用抗凝血尤其是肝素抗凝劑,。
二、ELISA樣本處理
1,、血清：室溫血液凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心。
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清,，如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心
3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成分時,，用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清，檢測細(xì)胞內(nèi)的成分時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右，通過反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成分,。
5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后,，稱取重量,，加入一定量的PBS,，PH7.4，用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?，?biāo)本融化后任然保持2-8°C的溫度,，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清，分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,，
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行試驗,，若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20°C保存,，單應(yīng)避免反復(fù)凍融,。