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ELISA實(shí)驗(yàn)中洗板機(jī)洗板關(guān)鍵點(diǎn)
閱讀：198 發(fā)布時(shí)間：2022-10-10洗板機(jī)洗板人為因素少,，速度快,，條件恒定，但是使用洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)注意以下三個(gè)關(guān)鍵點(diǎn),。
1,、洗滌參數(shù)
主要的參數(shù)是洗滌量。自動(dòng)洗板機(jī)會(huì)分配洗滌液,。如果你之前遭遇過高背景,，那么不要猶豫,，將洗滌量調(diào)為高，最好是比包被體積更高,。太少的洗滌液會(huì)讓一部分分析表面洗滌不到,，從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同,。
江萊生物ELISA試劑盒的使用手冊(cè)中列出包被量,。我們建議使用350µl洗滌液進(jìn)行洗滌，以便清潔整個(gè)反應(yīng)孔的壁,。一般來(lái)說,，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少,。
2,、洗滌次數(shù)
影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量。當(dāng)然,，洗滌次數(shù)越多,，背景越低。然而,，太多次的洗滌會(huì)降低信號(hào)強(qiáng)度，使其難以測(cè)定,。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次,。不過，一般而言,，包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少,。對(duì)于用戶包被的ELISA板，必須優(yōu)化洗滌次數(shù),。
控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過量的洗滌液,。一般來(lái)說，96孔板的每個(gè)孔能容納330至460 µl,。不過,，有些自動(dòng)化洗板機(jī)可設(shè)置程序，分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個(gè)量的洗滌液,，比如1 ml,。它是如何做到的呢？其實(shí)很簡(jiǎn)單,，就是在分液的同時(shí)打開吸液功能,。換句話說，隨著分液器分配更多的液體,，抽吸器也將液體吸出,。這種技術(shù)能增加洗滌量,，但不會(huì)溢出到其他孔中。
3,、抽 吸
還有一些參數(shù)會(huì)影響洗滌步驟的效果,。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置，這兩者都能調(diào)整,，以降低背景（殘留量）和差異,。
殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體，它們會(huì)增加背景信號(hào),。殘留量越小,，殘留液體越少，轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少,。
吸液高度會(huì)明顯影響殘留量,；如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大，那就會(huì)讓殘留量急劇增加,。反之,，如果洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部，那么也會(huì)使吸液效率降低,，殘留量增加,。
目前的洗板機(jī)一般使用兩種類型的洗頭：剛性和浮動(dòng)。浮動(dòng)洗頭中的吸頭可在洗滌過程中自由上下移動(dòng),，而剛性洗頭則固定在適當(dāng)?shù)奈恢?。使用剛性洗頭的洗滌操作在優(yōu)化起來(lái)更為復(fù)雜，因?yàn)槟阈枰浅Ｗ屑?xì)地調(diào)整吸液高度,。如果你們實(shí)驗(yàn)室使用幾種不同的板,，那可能會(huì)很耗時(shí)。在使用浮動(dòng)洗頭時(shí),，吸頭會(huì)降到反應(yīng)孔的底部,。調(diào)整高度就不是很重要，因此洗頭會(huì)下降到底部,。
抽吸的位置也對(duì)殘留量有著重要影響,；如果每個(gè)孔只使用一個(gè)抽吸點(diǎn)（這很常見，因?yàn)楦欤?，那么抽吸的位置需要?yōu)化,。*佳的位置取決于洗頭的性狀，但它幾乎不在反應(yīng)孔的中間,，即使這是所有洗頭常見的默認(rèn)位置,。一般來(lái)說，最佳位置在孔中間與孔壁之間的某處。
反應(yīng)孔的形狀也會(huì)影響殘留量,。C形底（平底圓角）的微孔板一般會(huì)比那些平底尖角的微孔板殘留量更低,。
洗板時(shí)應(yīng)注意：
1.需每天校正注液量及殘液量，洗滌后殘液量不得大于2 μl,。
2.及時(shí)更換破損吸液針,，避免破壞底板包被。
3.針對(duì)不同酶標(biāo)板注意調(diào)整吸液頭下降高度,，避免沖洗針頭卡住酶標(biāo)板,。
4.注意調(diào)整洗液量，洗液量過多將溢出,，過少將達(dá)不到洗滌效果,。
5.關(guān)機(jī)前使用蒸餾水沖洗管道，避免洗液的結(jié)晶物堵塞管道,。
6.不同種試劑盒的洗液嚴(yán)禁混合使用,。