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細胞周期的測定原理與操作步驟：

一,、原理

1、細胞周期指細胞一個世代所經(jīng)歷的時間,。從一次細胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個周期,。細胞周期反應(yīng)了細胞增殖速度。

2,、單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法,，但它不能代表細胞群體的周期，故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期,。

3,、測定細胞周期的方法很多，有同位素標記法、細胞計數(shù)法等,，這里介紹一種利用BrdU滲入測定細胞周期的方法,。

4、BrdU（5-溴脫氧尿嘧啶核苷）加入培養(yǎng)基后,，可做為細胞DNA復(fù)制的原料,，經(jīng)過兩個細胞周期后，細胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2,，反映在染色體上應(yīng)表現(xiàn)為一條單體淺染,。如經(jīng)歷了三個周期，則染色體中約一半為兩條單體均淺染,，另一半為一深一淺,。細胞如果僅經(jīng)歷了一個周期，則兩條單體均深染,。計分裂相中各期比例,，就可算出細胞周期的值。

二,、操作步驟

1,、細胞生長至指數(shù)期時，向培養(yǎng)液中加入BrdU,，使終濃度為10μg/ml,。

2、44小時加秋水仙素,，使每ml中含0.1μg,。

3、48小時后常規(guī)消化細胞至離心管中,，注意培養(yǎng)上清的漂浮細胞也要收集到離心管中,。

4、常規(guī)染色體制片（見第三部分：染色體技術(shù)）,。

5,、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上，鋪上2×SSC 液,，距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘,。

6、棄去2×SSC液,，流水沖洗,。

7、Giemsa液染色10分鐘,，流水沖洗,，晾干,。

8、鏡檢100個分裂相,，計,、二、三,、四細胞期分裂指數(shù),。

9、計算： 細胞周期（Tc）=48/{（M1+2M2+3M3+4M4）/100}（小時）

附：（1）BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml 4℃下避光保存,。

（2）2×SSC配制: NaCl 1.75克,，檸檬酸三鈉•2H2O 0.88克，加水至100ml,，4℃保存,。