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選擇合適二抗需考慮方面
閱讀：425 發(fā)布時(shí)間：2022-7-25 二抗是指用于靶向結(jié)合一抗的抗體,。在多種免疫印跡,、ELISA以及免疫熒光等免疫實(shí)驗(yàn)中，二抗經(jīng)常和一抗結(jié)合使用以檢測(cè)目標(biāo)蛋白,。很多二抗都帶有標(biāo)記物,，例如Alexa Fluor熒光染料或辣根過(guò)氧化物酶（HRP），從而使二抗的信號(hào)可以被檢測(cè)到,。
實(shí)驗(yàn)中也可以使用帶有標(biāo)記物的一抗,，但是二抗有很多優(yōu)點(diǎn)。無(wú)論是使用哪種一抗進(jìn)行檢測(cè),，使用二抗可便于更換不同的標(biāo)記物,。例如，同樣的一抗可以與HRP標(biāo)記二抗一起用于免疫印跡,，也可以與另一種Alexa Fluor 488熒光標(biāo)記二抗一起用于免疫熒光實(shí)驗(yàn),。
另外，二抗結(jié)合在抗原位置的標(biāo)記染料比直標(biāo)一抗要多,，從而增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào),。使用二抗可以避免對(duì)一抗進(jìn)行復(fù)雜且昂貴的化學(xué)標(biāo)記（偶聯(lián)），而且偶聯(lián)反應(yīng)（具有氨基酸特異性）可能干擾一抗對(duì)抗原的識(shí)別,。
二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體,，上通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。由于二抗所具備的優(yōu)點(diǎn)使得其在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中得以廣泛應(yīng)用,，如WB/ELISA/IHC/IP等,。二抗針對(duì)某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用特定標(biāo)記的二抗可以免去對(duì)每一個(gè)一抗進(jìn)行標(biāo)記,，大大節(jié)省了時(shí)間和費(fèi)用,；此外,，一個(gè)一抗分子可以同時(shí)結(jié)合幾個(gè)二抗分子，從而使信號(hào)大大增強(qiáng),，提高了實(shí)驗(yàn)靈敏度,。
二抗，廣義上是指專(zhuān)門(mén)和一抗進(jìn)行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體,。檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,，在選擇二抗的時(shí)候要綜合考慮一抗的類(lèi)型及后繼檢測(cè)方案的要求，一般來(lái)說(shuō),，選擇合適的二抗需要從以下幾個(gè)方面考慮：
1.一抗的種屬來(lái)源
根據(jù)一抗的物種來(lái)源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗,。例如：一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或兔抗小鼠等）,。
2.一抗的類(lèi)別亞型
二抗需與一抗的類(lèi)別或亞類(lèi)相匹配,。這通常是針對(duì)單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類(lèi)免疫球蛋白,，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體,。單克隆抗體的類(lèi)別及亞型通常會(huì)在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中有描述，如果一抗是小鼠IgM,，那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗IgM,。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞型（IgG1、IgG2a,、IgG2b,、IgG3），那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合,，或者你也可以選擇專(zhuān)門(mén)針對(duì)這一亞型的二抗,。此種抗體在雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其合適。
3.二抗的藕聯(lián)標(biāo)記
一般來(lái)講,，藕聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過(guò)氧化酶HRP）、熒光基團(tuán),、生物素,、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn),。WB和ELISA常用的二抗是酶標(biāo)二抗,，而免疫熒光實(shí)驗(yàn)中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗，而金顆粒標(biāo)記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中,。