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細胞轉(zhuǎn)染實驗常用步驟
閱讀:489 發(fā)布時間:2022-5-5細胞轉(zhuǎn)染實驗常用步驟:
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準備
① 將400ul去核酸酶水加入管中,,震蕩10秒鐘,溶解脂狀物,。
② 震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存,,使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1:1-1:2/脂質(zhì)體 體積:DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞,。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基,。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,,再次震蕩,。
3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。
4. 吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,,用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次,。
5. 加入混合液,將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時,。
6. 到時后,,根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液,之后加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時,。