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那么在細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)際操作過程中應(yīng)注意哪些事項(xiàng)呢,？

1,、凍存和復(fù)蘇最好用新配制的培養(yǎng)液,。

2,、DMSO應(yīng)過濾除菌,，甘油用高壓消毒。

3,、細(xì)胞懸液分裝凍存時(shí)要迅速,，均勻。安瓿封口后先放入0.05‰美藍(lán)溶液中,，使冷凍保護(hù)劑分布均衡,，且可檢出有滲漏的壞安瓿。安瓿上貼上標(biāo)簽,，作好記錄,，包括細(xì)胞的種屬、來源,、代數(shù),、凍存日期、數(shù)量,、凍存位置,、備注等。

4,、細(xì)胞降溫應(yīng)逐步進(jìn)行,，先以每分鐘降1～3℃的速度降至-30℃，再加速以15～30℃/分鐘降至-150℃,，隨即迅速轉(zhuǎn)入液氮,。

5、復(fù)蘇時(shí),，取出后立即放入37℃水浴中,，搖動(dòng)安瓿，使其*恢復(fù)懸液狀態(tài)（20～60秒）,。打開安瓿,，將內(nèi)容物倒入至少10ml*培養(yǎng)基中，100g離心10分鐘,。去上清液,，加入新鮮培養(yǎng)液,，混勻，培養(yǎng),。

6,、吸取過營養(yǎng)液后的吸管不能再用火焰燒灼，因?yàn)闅埩粼谖茴^中的營養(yǎng)液能燒焦形成炭膜,，再用時(shí)會(huì)把有害物帶入營養(yǎng)液中,。

7、開啟,、關(guān)閉長有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶時(shí),，火焰滅菌時(shí)間要短，防止因溫度過高燒死細(xì)胞,。

8,、換液時(shí)傾倒廢液，瓶口不能接觸廢液缸,，速度不能過快,，防止廢液四濺。

9,、吹打細(xì)胞時(shí),，要注意邊角的細(xì)胞是否吹打下來。

10,、手或相對(duì)較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上,，即不可以在開口容器上方操作。

11,、每次操作只處理一株細(xì)胞,，以免造成細(xì)胞交叉污染。

12,、注意自身的安全,，對(duì)于來自人源性或病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心。操作過程中,，應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生,，小心有毒性試劑例如DMSO等。

13,、從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存,，但最好為對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，在凍存前一天最好換一次培養(yǎng)液,。