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支原體污染的檢測及鑒定方法
閱讀：640 發(fā)布時間：2022-4-13支原體污染的檢測及鑒定方法：
1,、分離培養(yǎng)法
支原體的病原學檢測主要是從被污染的細胞,、雞胚中分離培養(yǎng)出支原體來確定,，分離培養(yǎng)法是檢測支原體污染中最為可靠準確的方法,。但是支原體對環(huán)境的影響敏感，容易被滅活,，而且分離培養(yǎng)操作相對繁瑣,，所需時間較長，因此只能夠?qū)χгw污染進行定性觀察,。分離培養(yǎng)法在常規(guī)的支原體檢測中多用于輔助其它檢測方法,。
2、DNA熒光染色法
DNA熒光染色法較分離培養(yǎng)法縮短了檢測周期,，主要用于細胞培養(yǎng)中污染支原體的檢測,。DNA熒光染色法正是利用熒光染色劑雙苯咪唑（Bisbenzimidzole）Hoechst33258能夠結(jié)合支原體DNA中的A-T堿基富集區(qū)域的原理，被支原體污染的細胞經(jīng)染色后,，其細胞核外與細胞周圍可看到許多大小均一的熒光點,，即是富含A-T堿基區(qū)域的支原體DNA。
3,、PCR技術
PCR作為一種快速、靈敏、特異且簡便的基因診斷技術已應用于科學研究和疾病的診斷,。根據(jù)支原體基因組內(nèi)的保守序列設計特異引物,，對待檢樣品的核酸進行擴增，通過對擴增產(chǎn)物的大小分析作出診斷,。PCR檢測技術用于支原體污染的檢測,，周期短、靈敏度高,、特異性好,、操作簡單且一次可檢測大量樣品。
4,、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）
ELISA用于支原體污染的檢測中,，有著良好的特異性和敏感性，一次可以完成大量樣品的檢測,。如今已有LONZA等公司開發(fā)了針對細胞中污染支原體的檢測試劑盒,，具有簡便、快速與定量定性檢測等特點,。
5,、電鏡
一般在細胞培養(yǎng)48～72小時，細胞接近匯合前,，用胰酶消化細胞制成細胞懸液后進行固定,、包埋、切片后才能進行觀察,。
6,、定期檢測
支原體感染會使培養(yǎng)細胞慢慢枯萎，因此對培養(yǎng)細胞定期進行支原體檢測非常重要,。一般來說每1至3個月就應該進行一次支原體檢測,。將定期支原體檢測常規(guī)化堅持下去，是細胞培養(yǎng)實驗室應對支原體感染的關鍵,。