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細胞凍存的注意事項
閱讀：325 發(fā)布時間：2022-3-15細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中,，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開活體開始原代培養(yǎng),，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要,。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久; 細胞儲存在液氮中,，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的,。
關于細胞凍存的注意事項：
1. 為保持細胞最大存活率,，一般都采用慢凍存融的方法,。
2. 凍存物距液氮面越近溫度越低。標準的低凍速度為－1℃~12℃/ 分鐘,，當溫度下降達－25℃時,，下降速度可增至－5~－10℃/ 分鐘，到－100℃時則可迅速凍入液氮中,。因此要適當掌握凍存物下降入液氮中的速度,，過快能影響細胞內(nèi)水分透出，太慢則促冰晶形成,。
3. 初次凍存者在下降凍存時,，宜先用細木棒伸入罐中探測液面位置，然后需用溫度計與凍存物并行的辦法,，以觀測下降凍存物的速度,、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關系，當已掌握以上各參數(shù)和凍存技術熟練后,，僅按下降時間和下降距離便可獲理想凍存效果,。
4. 各種細胞對凍存速度的要求也不一樣；上皮細胞和成纖維細胞耐受性可能大些,，骨髓干細胞－2~－3℃/ 分鐘合適,；胚胎細胞耐受性較小，不宜太快,?？傊谝婚_始時，下降速度不能超過－10℃/ 分鐘,。
5. 用什么防護劑合適和用量多大,，要依細胞而定，初代培養(yǎng)細胞用 DMSO 較好,，一般細胞可用甘油,；用量以較小為好。有人認為人皮膚上皮細胞貯存在 20%-30% 甘油中很好,。
6. 原則上細胞在液氮中可貯存多年,，但為妥善起見，凍存一年后,，應再復蘇培養(yǎng)一次,，然后再繼續(xù)凍存。
7. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時,，要做好防護工作,，以免凍傷。
8. 注意自身的安全,，對于來自人源性或病毒感染的細胞株應特別小心,。操作過程中,，應避免引起氣溶膠的產(chǎn)生，小心有毒性試劑例如 DMSO,，并避免尖銳物品傷人等,。
1. 為保持細胞最大存活率,，一般都采用慢凍存融的方法,。
2. 凍存物距液氮面越近溫度越低。標準的低凍速度為－1℃~12℃/ 分鐘,，當溫度下降達－25℃時,，下降速度可增至－5~－10℃/ 分鐘，到－100℃時則可迅速凍入液氮中,。因此要適當掌握凍存物下降入液氮中的速度,，過快能影響細胞內(nèi)水分透出，太慢則促冰晶形成,。
3. 初次凍存者在下降凍存時,，宜先用細木棒伸入罐中探測液面位置，然后需用溫度計與凍存物并行的辦法,，以觀測下降凍存物的速度,、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關系，當已掌握以上各參數(shù)和凍存技術熟練后,，僅按下降時間和下降距離便可獲理想凍存效果,。
4. 各種細胞對凍存速度的要求也不一樣；上皮細胞和成纖維細胞耐受性可能大些,，骨髓干細胞－2~－3℃/ 分鐘合適,；胚胎細胞耐受性較小，不宜太快,?？傊谝婚_始時，下降速度不能超過－10℃/ 分鐘,。
5. 用什么防護劑合適和用量多大,，要依細胞而定，初代培養(yǎng)細胞用 DMSO 較好,，一般細胞可用甘油,；用量以較小為好。有人認為人皮膚上皮細胞貯存在 20%-30% 甘油中很好,。
6. 原則上細胞在液氮中可貯存多年,，但為妥善起見，凍存一年后,，應再復蘇培養(yǎng)一次,，然后再繼續(xù)凍存。
7. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時,，要做好防護工作,，以免凍傷。
8. 注意自身的安全,，對于來自人源性或病毒感染的細胞株應特別小心,。操作過程中,，應避免引起氣溶膠的產(chǎn)生，小心有毒性試劑例如 DMSO,，并避免尖銳物品傷人等,。