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解析細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑問題
閱讀：315 發(fā)布時間：2021-12-151.谷氨酰胺使用方法是什么,？
答：谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,，故4℃下放置1周可分解50%,，使用中單獨(dú)配制，置-20℃冰箱中保存,，用前加入培養(yǎng)液中,。
2.碳酸氫鈉在室溫條件存放是否穩(wěn)定？
答：碳酸氫鈉白色粉末,，或不透明單斜晶系細(xì)微結(jié)晶,。比重2.159。無臭,、味咸,，可溶于水,，微溶于乙醇,。其水溶液因水解而呈微堿性，受熱易分解,，在65℃以上迅速分解,，在270℃時*失去二氧化碳，在干燥空氣中無變化,，在潮濕空氣中緩慢分解,。
3.培養(yǎng)細(xì)胞生長減慢的原因有哪些？其解決辦法有哪些？
答：可能得原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清,；培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子等耗盡或缺乏或已被破壞,；培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；試劑保存不當(dāng),；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)找出可能的原因。
解決辦法：增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度,；讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液,；換入新鮮配制培養(yǎng)液；補(bǔ)加谷氨酰胺或生長因子等,；用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物,，或用抗生素除菌,；血清需保存在-5℃到-20℃；培養(yǎng)液需在2－8℃避光保存,；含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存,，并在2 周內(nèi)用完；分離培養(yǎng)物,，檢測支原體,。
4.L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎,？
答：L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時非常重要的,。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源,、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝,。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，降解率隨保存溫度而變,。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成,，而氨對于一些細(xì)胞具有毒性。
5.細(xì)胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎,？
答：不見得,！因?yàn)橐鹊鞍酌溉芤旱南芰κ呛腿芤旱膒H、溫度,、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關(guān),。通常情況下，pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力zui強(qiáng),。另外,，鈣,、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進(jìn)行傳代消化前,，一定要用D-Hanks液或PBS液反復(fù)沖洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，以便于將含血清的培養(yǎng)基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力,。通常使用的消化液濃度為：
（1）0.05％胰蛋白酶＋0.02％EDTA,；
（2）0.25% 胰蛋白酶
多數(shù)細(xì)胞傳代消化可使用0.25％胰蛋白酶＋0.02％EDTA這種消化液。
6.二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎,？使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什么,？
答：二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,，以便保持抑制胰蛋白酶的活性,。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前，用EDTA清洗細(xì)胞,，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子,。
7.GlutaMAX-I是什么？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I,？這個二肽有多穩(wěn)定,？
答：GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽，是一個L-谷氨酰胺的衍生物,，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護(hù),。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用,。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定,，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I 二肽溶液有zui小的降解,，如果在相同條件下,，L-谷氨酰胺幾乎*降解
8.培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？
答：丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,，但是，如果沒有葡萄糖的話,，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉,。
9.Hank′s 平衡鹽溶液（HBS）和Earle′s平衡鹽溶液（EBS）有什么本質(zhì)的功能差別？
答：HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagle′s （2.2g/L）中比在Hanks′ （0.35g/L） 中高,。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,，以維持溶液的PH值。Eagle′s液在空氣水平的CO2 中,，溶液會變堿,，Hanks′液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,，需要用Eagle′s液,。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲存的組織，用Hanks′液就可以了,。