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選購ELISA試劑盒技巧指南
閱讀：927 發(fā)布時(shí)間：2021-11-17酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA) 技術(shù)從1970年代發(fā)展至今已近半個(gè)世紀(jì)，是一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室最基本的免疫檢測技術(shù),，被廣泛的應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床檢驗(yàn)。Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,，特異性強(qiáng),，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定,、易保存,，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素,。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測,。那么面對(duì)市面上數(shù)以千計(jì)的試劑盒，數(shù)百家供應(yīng)商,，對(duì)于剛進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的新手或者準(zhǔn)備開展ELISA實(shí)驗(yàn)的人員,， 又該如何選擇適合且質(zhì)量又可靠的ELISA試劑盒呢？本文將為您提供*選購ELISA試劑盒技巧指南,！
1. 首先選定ELISA類型
ELISA技術(shù)可用于測定抗原,，也可用于測定抗體。
ELISA方法中有三個(gè)必要的試劑：
(1) 固相的抗原或抗體,，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）,；
(2) 酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"（conjugate）,；
(3) 酶反應(yīng)的底物,。
一般可將ELISA分為以下幾種類型，實(shí)驗(yàn)先需要根據(jù)自己的待檢物來確定試劑盒類型,。
1) 雙抗體夾心法：針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相捕獲抗體和酶標(biāo)檢測抗體,。適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原如血漿中的細(xì)胞因子，不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原。同理,，也有雙抗原夾心法測抗體,。
2) 直接法：將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一抗,，即可測定抗原總量,。此法操作手續(xù)簡短，因無須使用二抗可避免交互反應(yīng),。
3) 間接法：間接法是檢測抗體常用的方法,，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）來檢測與固相抗原結(jié)合的待檢抗體。
4) 競爭法：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn),，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定,，可以采用競爭法模式。當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去,，或不易得到足夠的純化抗原時(shí),，可用此法檢測特異性抗體。
2. 根據(jù)樣品中檢測物水平來選擇試劑盒
如果實(shí)驗(yàn)君對(duì)于樣品中待檢物的水平?jīng)]有任何可參考的數(shù)據(jù),，最好選擇寬動(dòng)力學(xué)檢測范圍的試劑盒,。如果樣品中待檢物的含量很低，建議選擇高靈敏度的試劑盒,。為了降低基質(zhì)效應(yīng),，有必要用稀釋液至少做2倍稀釋。如果樣品中待檢物含量遠(yuǎn)超過試劑盒的檢測范圍（標(biāo)曲范圍）,， 也需做適當(dāng)?shù)谋稊?shù)稀釋,。在最后計(jì)算結(jié)果時(shí)，需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。
3. 細(xì)致比較試劑盒關(guān)鍵性技術(shù)參數(shù)
ELISA試劑盒的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)包括板內(nèi)差異性,、板間差異性、批間差異性,、重復(fù)性,、特異性及交叉反應(yīng)性、回收率等,。如果實(shí)驗(yàn)君經(jīng)常開展ELISA實(shí)驗(yàn),，建議使用同一的試劑盒，這樣可盡量保證數(shù)據(jù)的重復(fù)性(當(dāng)然前提是實(shí)驗(yàn)條件的一致性),。對(duì)于科研用的定量ELISA試劑盒,，不同的使用的抗體對(duì)、酶以及底物,、工藝和實(shí)力不盡相同,，自然不同試劑盒測出的數(shù)據(jù)會(huì)有差異,。
4. 根據(jù)樣本可獲得性來選擇試劑盒
通常而言，商業(yè)化試劑盒的樣品用量都在50ul或100ul, 但也有一些供應(yīng)商的試劑盒對(duì)樣品的用量要求可少至10ul,。如果您的樣品很珍貴或較難獲取,，則需要認(rèn)真考慮試劑盒對(duì)樣品用量的要求。如果樣品量少,，且要做多因子檢測時(shí)更需謹(jǐn)慎,。
5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)物種及待檢樣品性質(zhì)來選擇ELISA
如果實(shí)驗(yàn)君的實(shí)驗(yàn)樣品為人、小鼠或大鼠樣品,，那么要選擇一個(gè)合適的試劑盒相對(duì)容易,，但如果您的實(shí)驗(yàn)樣品來源于其他物種如雞、牛,、猴等,，則市面上能提供的試劑盒種類卻很少。且不可輕信能提供近萬種試劑盒,，覆蓋多物種的供應(yīng)商,。但如果又非要檢測這些物種的指標(biāo)時(shí)，最好要對(duì)待檢物(如有種屬差異性)進(jìn)行同源性分析以及試劑盒的種屬交叉反應(yīng)數(shù)據(jù),。對(duì)于樣品類型而言，一般的商業(yè)化試劑盒都經(jīng)過血清,、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液的驗(yàn)證,。在選擇試劑盒時(shí)，最好要詳細(xì)閱讀說明書,，比如血漿樣本抗凝劑的使用是否與試劑盒兼容,。另外，在某些情形下樣品中會(huì)存在干擾因素比如溶血血漿,、高脂肪含量的樣品,、人抗鼠抗體(HAMA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清中含胎牛血清等,。因此需根據(jù)樣品來選擇試劑盒,，必要時(shí)還要根據(jù)樣本來適當(dāng)優(yōu)化?；蛟跇悠肥占?，最好先閱讀一些可靠供應(yīng)商試劑盒的說明書或直接咨詢。如果您的樣品為組織或細(xì)胞裂解物,，則需要更謹(jǐn)慎的選擇試劑盒,。市面上大多數(shù)的商業(yè)化試劑盒沒有經(jīng)過多種來源組織樣本的驗(yàn)證。這需要實(shí)驗(yàn)君能理解不是所有試劑盒所用的抗體對(duì),，都能特異的從一堆裂解物蛋白中特異檢出您的目的蛋白,，還要考慮組織樣品的基質(zhì)效應(yīng)(Matrix Effect)等,。但如果實(shí)驗(yàn)君要了解組織樣品的制備問題，我們另起一文來總結(jié),。
6. 供應(yīng)商資質(zhì)評(píng)估
縱觀國內(nèi)外ELISA試劑盒供應(yīng)商,，估計(jì)至少100余家。有些供應(yīng)商可提供數(shù)百種常用指標(biāo)ELISA,，然而有些供應(yīng)商則聲稱可提供數(shù)千種甚至上萬種指標(biāo)的試劑盒,，但質(zhì)量參差不齊，更有濫竽充數(shù)禍害科研之輩,。那如果選擇供應(yīng)商呢,？ 第一. 從同行或?qū)嶒?yàn)室同僚了解供應(yīng)商的口碑，售前售后的處理情況,。第二. 查詢供應(yīng)商的網(wǎng)站詳細(xì)了解相關(guān)指標(biāo),，可查詢這些指標(biāo)是否已經(jīng)開發(fā)出特異性抗體？如果查遍全球連抗體都還不可獲取,，又如何開發(fā)出ELISA試劑盒呢,？ 第三. 文獻(xiàn)引用是王dao，尤其是SCI期刊文章對(duì)供應(yīng)商產(chǎn)品的引用,。第四. 了解供應(yīng)商的歷史和品牌史,，很多供應(yīng)商頻頻更換公司名或更換公司注冊(cè)地，其中名堂實(shí)驗(yàn)君應(yīng)該能悟出,。不要迷信國外“品牌",，國外“品牌"不代表是國際zhi名品牌。很多打著國外旗號(hào)的公司,，其實(shí)就是空殼的皮包公司,，從全球OEM劣質(zhì)產(chǎn)品。國外供應(yīng)商也有售后不給力的時(shí)候,。
7. 經(jīng)費(fèi)預(yù)算
說了半天,，還是要看課題經(jīng)費(fèi)的預(yù)算。沒經(jīng)費(fèi)咋搞科研呢,？國際公ren的zhi名品牌一般質(zhì)量可靠,，文獻(xiàn)引用多。但國際品牌由于進(jìn)口和國際運(yùn)輸?shù)瘸杀据^高,，因此售價(jià)也較高,。其實(shí)優(yōu)質(zhì)國產(chǎn)品牌也是不錯(cuò)的選擇， 因省去不少物流和報(bào)關(guān)費(fèi)用,，與國外進(jìn)口試劑盒相比價(jià)格上有比較大的優(yōu)惠,，而且能提供比較靈活的包裝規(guī)格。
8. 認(rèn)清訂購渠道
不論是國際還是國內(nèi)品牌,，都需要在訂購前先與詳細(xì)溝通產(chǎn)品細(xì)節(jié)（比如酶標(biāo)板是否可拆卸）,，了解售前售后技術(shù)服務(wù)能力等,。然后咨詢其訂購渠道，比如直接向訂購或通過中國區(qū)或省級(jí)授權(quán)代理商經(jīng)銷商訂購,。謹(jǐn)防假mao產(chǎn)品,，花了錢是小事，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性,、真實(shí)性是大事呀,，耽誤了