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幾種常用免疫組織化學技術的原理
閱讀：698 發(fā)布時間：2021-9-7免疫組化技術的優(yōu)點
1、特異性強 免疫學的基本原理決定了抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細胞中抗原的特定顯示,，如角蛋白(keratin)顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細胞成分,。只有當組織細胞中存在交叉抗原時才會出現(xiàn)交叉反應,。
2、敏感性高 在應用免疫組化的起始階段,，由于技術上的限制，只有直接法,、間接法等敏感性不高的技術,，那時的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍,；現(xiàn)在由于ABC法或SP法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍,、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細胞中與抗原結(jié)合,，這樣高敏感性的抗體抗原反應，使免疫組化方法越來越方便地應用于常規(guī)病理診斷工作,。
3,、定位準確、形態(tài)與功能相結(jié)合 該技術通過抗原抗體反應及呈色反應,，可在組織和細胞中進行抗原的準確定位,，因而可同時對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察,，這樣就可以進行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,，對病理學研究的深入是十分有意義的。
幾種常用免疫組織化學方法的原理
1,、免疫熒光方法
免疫熒光方法是最早建立的免疫組織化學技術。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,，先將已知抗體標上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應抗原,，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光,，從而可確定組織中某種抗原的定位,，進而還可進行定量分析。由于免疫熒光技術特異性強,、靈敏度高、快速簡便,，所以在臨床病理診斷、檢驗中應用比較廣,。
2、免疫酶標方法
免疫酶標方法是繼免疫熒光后,，于60年代發(fā)展起來的技術?；驹硎窍纫悦笜擞浀目贵w與組織或細胞作用，然后加入酶的底物,，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡,，對細胞表面和細胞內(nèi)的各種抗原成分進行定位研究,。免疫酶標技術是目前最chang用的技術,。
本方法與免疫熒光技術相比的主要優(yōu)點是：定位準確,，對比度好,，染色標本可長期保存，適合于光,、電鏡研究等。
免疫酶標方法的發(fā)展非常迅速,，已經(jīng)衍生出了多種標記方法，且隨著方法的不斷改進和創(chuàng)新,，其特異性和靈敏度都在不斷提高,，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的當屬PAP法,、ABC法、SP法等,。
3,、免疫膠體金技術
免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物,。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白,，對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響,。因此,，用膠體金標記一抗,、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,，就能對組織或細胞內(nèi)的抗原進行定性,、定位，甚至定量研究,。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高,，所以免疫膠體金技術特別適合于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究,。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進行光鏡觀察,。如應用銀加強的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。