化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
幾種常用免疫組織化學(xué)技術(shù)的原理
閱讀：758 發(fā)布時(shí)間：2021-9-7免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)
1,、特異性強(qiáng) 免疫學(xué)的基本原理決定了抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性,，因此,，免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示,，如角蛋白(keratin)顯示上皮成分,，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分,。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。
2,、敏感性高 在應(yīng)用免疫組化的起始階段,，由于技術(shù)上的限制，只有直接法,、間接法等敏感性不高的技術(shù),，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍,；現(xiàn)在由于ABC法或SP法的出現(xiàn),，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合,，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng),，使免疫組化方法越來越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。
3,、定位準(zhǔn)確,、形態(tài)與功能相結(jié)合 該技術(shù)通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位,，因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察,，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，對(duì)病理學(xué)研究的深入是十分有意義的,。
幾種常用免疫組織化學(xué)方法的原理
1,、免疫熒光方法
免疫熒光方法是最早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,，先將已知抗體標(biāo)上熒光素,，以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,，在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長的熒光,，從而可確定組織中某種抗原的定位,，進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng),、靈敏度高,、快速簡便，所以在臨床病理診斷,、檢驗(yàn)中應(yīng)用比較廣,。
2、免疫酶標(biāo)方法
免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后,，于60年代發(fā)展起來的技術(shù),。基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,，然后加入酶的底物,，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡,，對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究,。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前最chang用的技術(shù)。
本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是：定位準(zhǔn)確,，對(duì)比度好,，染色標(biāo)本可長期保存，適合于光,、電鏡研究等,。
免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法,，且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新,，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便,。目前在病理診斷中廣為使用的當(dāng)屬PAP法,、ABC法、SP法等,。
3,、免疫膠體金技術(shù)
免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠,，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對(duì)蛋白的生物學(xué)活性則沒有明顯的影響,。因此,，用膠體金標(biāo)記一抗,、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性,、定位,，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒,，且膠體金的電子密度高,，所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色,，因此也適合進(jìn)行光鏡觀察,。如應(yīng)用銀加強(qiáng)的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。