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細胞,，生物學名詞,。構成生物體的基本單位。體形極微,，在顯微鏡下始能窺見,。形狀多種多樣。主要由細胞核與細胞質構成,，表面有薄膜,。動植物細胞結構大致相同。植物細胞質膜外有細胞壁,，細胞壁中常有質體,，動物細胞質中常有中心體，而高等植物細胞中則無,。細胞有運動,、營養(yǎng)和繁殖等機能。

貼壁細胞：

1.  取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間,，無菌超凈臺內(nèi)吹干或用細胞培養(yǎng)級PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍,，再用細胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi),，種入細胞培養(yǎng)過夜,，使約為50%-80%滿。

2.  按照特定的實驗目的處理細胞后,，吸盡培養(yǎng)液,，加入1 ml固定液，固定10分鐘或更長時間(可4°C固定過夜),。

3.  去固定液,，用TBST工作液洗3次，每次3~5分鐘，吸盡液體,。洗滌時宜用搖床,，或手動晃動數(shù)次。

4.  用試劑盒中的正常山羊血清封閉液(E-IR-R110)封閉30分鐘,，可以在搖床上輕輕搖動,。

5.  去除封閉液，用稀釋的特定一抗?jié)窈袃?nèi)37°C避光孵育60分鐘,，可以在搖床上輕輕搖動,。為增強與一抗的結合，可以4°C孵育過夜,。

6.  去除一抗,，用TBST工作液洗滌3~5次，每次3~5分鐘,。每次洗滌時都可以在搖床上輕輕搖動,。

7.  去除TBST工作液，加入100 μL稀釋好的熒光標記的二抗?jié)窈袃?nèi)37°C避光孵育60分鐘,。

8.  TBST工作液洗滌3~5次,，每次3~5分鐘，期間適當注意避光操作,。

9.   復染核：滴加試劑盒中的DAPI染色液(E-IR-R103)避光孵育5 min,，對標本進行染核，TBST工作液洗滌玻片5分鐘,，洗滌4次去除多余的DAPI染色液,。

10.   滴一滴試劑盒提供的抗熒光淬滅封片液(E-IR-R119)于載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片,，盡量避免氣泡,。使細胞接觸封片液，切勿弄反,。

11.   如果一抗選用適當,，在熒光顯微鏡下可以觀察到熒光。

懸浮細胞：

A.   離心收集細胞樣品于1.5 ml離心管內(nèi),，吸除上清后輕輕彈散細胞,。

B.   加入0.5 ml固定液，緩緩懸起細胞,，固定10分鐘或更長時間(可4°C過夜)。

C.   離心去固定液,，用TBST工作液洗3次,，每次3~5分鐘。洗滌期間可以用手或搖床輕輕晃動。

D.   最后一次離心后吸去大部分液體保留約50 μL液體,，再緩緩懸起細胞,，滴加至載玻片上，盡量使細胞分布均勻,。

E.   稍晾干,，使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動。如果條件許可,，可以使用適當?shù)碾x心機,，通過離心把細胞貼緊在載玻片上。

F.   用試劑盒中的正常山羊血清封閉液(E-IR-R110)封閉30分鐘,。

G.   去封閉液,，用稀釋的特定一抗?jié)窈袃?nèi)37°C避光孵育60分鐘。為增強與一抗的結合,，可以4°C孵育過夜,。

H.   去除一抗，用TBST工作液洗滌3~5次,，每次3~5分鐘,。

I.    去除TBST工作液，加入100 μL稀釋好的熒光標記的二抗?jié)窈袃?nèi)37°C避光孵育60分鐘,。

J.    TBST工作液洗滌3~5次,，每次3~5分鐘，期間適當注意避光操作,。

K.   復染核：滴加試劑盒中的DAPI染色液(E-IR-R103)避光孵育5 min,，對標本進行染核，TBST工作液洗滌玻片5分鐘,，洗滌4次去除多余的DAPI染色液,。

L.    滴一滴試劑盒提供的抗熒光淬滅封片液(E-IR-R119)于載玻片上，蓋上蓋玻片,，盡量避免氣泡,。

M.   如果一抗選用適當，在熒光顯微鏡下可以觀察到熒光,。