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Elisa常見(jiàn)樣本處理方法
閱讀：326 發(fā)布時(shí)間：2021-8-11Elisa是一種快速,、靈敏、準(zhǔn)確可靠的定量分析方法,。樣本的處理對(duì)于 Elisa 實(shí)驗(yàn)的成功有舉足輕重的作用,。
利用 ELISA 進(jìn)行檢測(cè)的樣本類(lèi)型包括：血液（血清、血漿）,，組織勻漿,、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清,，皮膚組織,、尿液、糞便,、肺泡灌洗液,、唾液、腦脊液,、胸腹水,、前列腺液、陰道分泌物等,。
下面我們就常見(jiàn)的樣本處理方法：
血液采取后應(yīng)盡快進(jìn)行處理,，使血清（漿）從與血細(xì)胞接觸的全血中分離出來(lái)。
Q: 血清與血漿的區(qū)別?
A: 血清是血液凝固后缺少纖維蛋原的血漿,，故血漿中除尚含有纖維蛋白原和 抗凝劑外,，其他成份均等同于血清,。
Q: 選擇血清還是血漿樣本？
A: 由于血清中缺乏很多的凝血因子,，但有凝血產(chǎn)物,。如果測(cè)凝血因子建議選擇血漿樣本；同時(shí)血漿中有纖維蛋白原,，如果纖維蛋白原對(duì)待檢測(cè)指標(biāo)有影響,，建議選擇血清樣本。
大多數(shù)情況下二者均可以選擇,。
處理方法：
1,、血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置 2 小時(shí)或 4 度過(guò)夜，然后1000×g 離心20分鐘,，取上清即可,。這是一個(gè)讓血液自然凝固的過(guò)程，溫度越低,，凝集越緩慢,，可根據(jù)需要添加促凝劑。
2,、血漿：血漿樣本需要抗凝,，一般建議用2.0%EDTA，1%肝素,，3.8%枸櫞酸鈉作為抗凝劑采集標(biāo)本,，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2~8度1000g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè),。根據(jù)待檢測(cè)目標(biāo)物的性質(zhì)不同選取不同的抗凝劑,。
3、枸櫞酸鈉(檸檬酸鈉)：Ca2+有凝血作用,，枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物,，從而阻止血液凝固。配成 109mmol/L的濃度和血液1:9, 106mmol/L的濃度和血液1:4
缺點(diǎn)：血液中溶解度低,，抗凝作用較弱,。
優(yōu)點(diǎn)：對(duì)凝血因子有很好的保護(hù)作用，大部分凝血試驗(yàn)都可用枸櫞酸鈉抗凝,。
4,、二胺四乙酸（EDTA）鹽：與血液中的鈣離子結(jié)合形成配位化合物， 從而阻止血液凝固,。15g/L EDTA和血液 1:10
優(yōu)點(diǎn)：對(duì)紅細(xì)胞和白細(xì)胞形態(tài)影響小,。
缺點(diǎn)：影響血小板的聚集。不適用于凝血實(shí)驗(yàn)和血小板功能相關(guān)實(shí)驗(yàn)的檢 測(cè)。
5,、肝素：通過(guò)與抗凝血酶Ⅲ結(jié)合,，增強(qiáng)抗凝血酶的作用，滅活絲氨酸蛋白 酶,，從而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集,，阻止血液凝固。肝素鈉 1g/L 與血液 1:10
優(yōu)點(diǎn)：抗凝能力強(qiáng),、不影響血細(xì)胞體積,、不易溶血、能耐高溫,。
缺點(diǎn)：引起白細(xì)胞聚集,。肝素抗凝血應(yīng)于短時(shí)間內(nèi)使用，否則放置過(guò)久血 液又可凝固,。