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ATCC細胞注意事項：

1,、首先肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,，然后再借助顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）,，這樣做可方便后期的對比。

2,、一定要用75%的酒精消毒（75%的酒精的水要經(jīng)過殺菌處理）,。

3、嚴格按照在無菌環(huán)境下操作的原則,，打開細胞培養(yǎng)瓶,。

4、將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒）,，放入另一無菌容器中（要換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）,。

5、用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,，洗3-4次遍,，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,，加入終止液終止,。

6、1000rpm,，5min離心,，重懸細胞。

7,、換新的細胞培養(yǎng)瓶,，37℃，5%CO2培養(yǎng),。

ATCC細胞操作流程：

主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡）,，co2孵箱。

細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：

細胞的復蘇培養(yǎng):從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,同時不斷搖動使之迅速融化,，然后用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱,，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內，在37℃,、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng),。

細胞傳代:原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時,，用0.25%胰酶消化1～2min,，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮,、分散,，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液,，然后加入倍量的培養(yǎng)基,，溫和混勻，吸管分裝混合液,，傳代擴增細胞,。