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技術(shù)文章

豬ELISA檢測試劑盒實驗流程方法

閱讀:207          發(fā)布時間:2021-3-26

豬ELISA檢測試劑盒實驗流程:

1. 產(chǎn)品僅用于科研實驗前標(biāo)準(zhǔn)品,、試劑及樣本的準(zhǔn)備,;

2. 加樣(標(biāo)準(zhǔn)品及樣本)100µL,37°C孵育1小時,;

3. 吸棄,,加檢測溶液A100µL,37°C孵育1小時,;

4. 洗板3次,;

5. 加檢測溶液B100µL,37°C孵育30分鐘,;

6. 洗板5次,;

7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘,;

8. 加終止液50µL,,立即450nm讀數(shù),。

豬ELISA檢測試劑盒操作步驟:

產(chǎn)品僅用于科研實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,,均需混勻,混勻時盡量避免起泡,。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍,。

1. 加樣:分別設(shè)空白孔、待測樣品孔,??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔加待測樣品100μl,,注意不要有氣泡,,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘,。

2. 棄去液體,,甩干,不用洗滌,。每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記抗小鼠IgG工作液
100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),,37℃,,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后,,棄去孔內(nèi)液體,,甩干,洗板5次,,每次浸泡1-2分鐘,,350μl/每孔,甩干,。

4. 依序每孔加底物溶液90μl,,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見孔內(nèi)有明顯藍色,,即可終止),。

5. 依序每孔加終止溶液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值),。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測,。

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