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ELISA試劑盒原理

 本試劑盒系由預(yù)包被豬瘟病毒重組E2蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬瘟病毒抗體,。實驗時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本,，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬瘟病毒抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色,；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有豬瘟病毒抗體。

ELISA試劑盒操作步驟

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫,。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對照1孔,、陰性/陽性對照各2孔,，未用的板條盡快密封，2～8℃保存,。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl,；陰、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻,，置37℃反應(yīng)30分鐘,。

5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次，拍干,。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌,，同步驟5,。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,，混勻,，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl,，混勻,，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）,。