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小鼠源細(xì)胞操作步驟與注意事項(xiàng)
閱讀:252 發(fā)布時(shí)間:2021-2-25小鼠源細(xì)胞操作步驟:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在*,、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻,;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,,再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻,;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,,再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻,;混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,,再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同),、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用,。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
小鼠源細(xì)胞注意事項(xiàng):
1,、所有試劑不能與皮膚直接接觸,。
2、務(wù)必使用潔凈的藥勺,,量筒或滴管取用試劑,,不準(zhǔn)用同一種工具同時(shí)連續(xù)取用多種試劑。
3,、取完一種試劑后,,應(yīng)將工具洗凈、擦干后,,方可取用另一種試劑,。
4、試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊,,不可放錯(cuò)瓶蓋和滴管,,絕不允許張冠李戴,用完后將瓶放回原處,。
5,、已取出的試劑不能再放回原試劑瓶?jī)?nèi)。