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大鼠ELISA試劑盒分類注意事項(xiàng)
閱讀：144 發(fā)布時(shí)間：2021-2-8原理
本試劑盒系由預(yù)包被豬瘟病毒重組E2蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)豬血清,、血漿樣本中豬瘟病毒抗體,。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬瘟病毒抗體,，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,；再加入酶標(biāo)記物,，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,，在孔中加TMB底物液,，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后,，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有豬瘟病毒抗體,。
操作步驟
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫,。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,，設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽性對(duì)照各2孔,，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存。
3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl,；陰,、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。
4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘,。
5.扣去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次,，拍干,。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應(yīng)30分鐘,。
7.洗滌，同步驟5,。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,，混勻,，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,，混勻,，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測(cè)定各孔吸光值（A值）,。
注意事項(xiàng)
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套,、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解,。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。
8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。