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原理

 本試劑盒系由預包被豬瘟病毒重組E2蛋白的酶標板,、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清,、血漿樣本中豬瘟病毒抗體,。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬瘟病毒抗體,，則將與酶標板上抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標記物,，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關,；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色,；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有豬瘟病毒抗體。

操作步驟

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復至室溫,。

2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔,、陰性/陽性對照各2孔,，未用的板條盡快密封，2～8℃保存,。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl,；陰、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻,，置37℃反應30分鐘,。

5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，重復洗滌5次，拍干,。

6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應30分鐘。

7.洗滌,，同步驟5,。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,，混勻,，37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液50μl,，混勻,，用空白孔調(diào)零,，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

注意事項

1.實驗操作時需戴手套,、穿工作衣,，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理,。

2.終止液具有腐蝕性,，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗,。

3.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋,，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶,，使用時需恢復至室溫以*溶解,。

5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈,。

6.用于檢測的樣品應保持新鮮,。

7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

8.不同批號試劑組分不得混用,。