技術(shù)文章
其它源細(xì)胞原理及處理方式
閱讀:204 發(fā)布時(shí)間:2021-2-4其它源細(xì)胞原理:
一般而言,,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期,。在熒光背景信號(hào)階段,,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù),。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析,。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值,。
其它源細(xì)胞處理方式:
1,、胃液、唾液,、尿液的采集方式一般現(xiàn)采現(xiàn)用,胃液,、唾液佳的采集時(shí)間是空腹采集,,一般隔夜尿不采集;
2,、采集血清時(shí),,一般要加入總體積1%的抗凝劑,采集后先室溫或4℃靜置半小時(shí)后,,800-1000rmpx5min分離,,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?/p>
3,、組織提取液,、肺泡灌洗液等,采集后離心分離,,800-1000rmpx5min,,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?/p>
4,、采集血漿時(shí)一般不加抗凝劑,,采集后立即離心800-1000rmpx5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?/p>
5,、不貼壁細(xì)胞(分泌性蛋白),,將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmpx10min,,吸取上清至另一10ml離心管中,,10000rmpx10min,-20℃或4℃保存,,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理。