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小鼠ELISA試劑盒標(biāo)本處理與操作流程
閱讀：277 發(fā)布時間：2021-1-20小鼠ELISA試劑盒標(biāo)本處理要求：
收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本,，儲存在 4 ℃ 備用,，如有特殊 原因需要周期收集標(biāo)本，將標(biāo)本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條件下保存,。避免反復(fù)凍融,。標(biāo)本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時， -20 ℃ 可保存 1 個月,。 -70 度可保存 6 個月,。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。
◇ 液體類標(biāo)本：
標(biāo)本必須為液體,，不含沉淀,。包括血清、血漿,、尿液,、胸腹水、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等。 1ml 的 全血可得到 0.5ml 的血清或血漿,。每個標(biāo)本量收集體積＝ 100ul × 檢測種類,。取材前須向銷售人員索要說明書。
◇ 血清：
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）,。收集上清。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
◇ 血漿：
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑 （ 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2） 混合 10-20 分鐘后,，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形 成，應(yīng)再次離心,。
◇ 尿液,、胸腹水、腦脊液：
用無菌管收集,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）,。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
◇ 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）,。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的 成份時，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬 /ml 左右,。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
◇ 組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的 PBS ,，緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin （ 抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）,。仔細(xì)收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要,，可以將樣品濃縮干燥,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。
小鼠ELISA試劑盒操作流程：
1. 整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū),、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實驗服,、儀器 ,、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用,；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭,；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作,；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置,。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,，且完成實驗后立即上機(jī)檢測,；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照,。
4. 小鼠ELISA試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,，并應(yīng)瞬時離心。
5. 內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),，并單獨存放,。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記,。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用,。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄,。