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小鼠ELISA試劑盒標本處理與操作流程
閱讀：297 發(fā)布時間：2021-1-20小鼠ELISA試劑盒標本處理要求：
收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定,。對收集后當天進行檢測的標本,，儲存在 4 ℃ 備用，如有特殊 原因需要周期收集標本,，將標本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條件下保存。避免反復凍融,。標本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時,， -20 ℃ 可保存 1 個月。 -70 度可保存 6 個月,。部分激素類標本需添加抑肽酶,。
◇ 液體類標本：
標本必須為液體，不含沉淀,。包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等,。 1ml 的 全血可得到 0.5ml 的血清或血漿。每個標本量收集體積＝ 100ul × 檢測種類,。取材前須向銷售人員索要說明書,。
◇ 血清：
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。收集上清,。如有沉淀形成,，應再次離心。
◇ 血漿：
應根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA ,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑 （ 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2） 混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）,。仔細收集上清,。如有沉淀形 成，應再次離心,。
◇ 尿液,、胸腹水、腦脊液：
用無菌管收集,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）,。仔細收集上清。如有沉淀形成,，應再次離心,。
◇ 細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）,。仔細收集上清。檢測細胞內的 成份時,，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。
◇ 組織標本：
切割標本后,，稱取重量,。加入一定量的 PBS ，緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin （ 抑肽酶）,。用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,，如有必要,，可以將樣品濃縮干燥,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。
小鼠ELISA試劑盒操作流程：
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū),、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服,、儀器 ,、耗材應獨立使用，不能混用,；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭,；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作,；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置,。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,，且完成實驗后立即上機檢測,；樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰,、陽性對照,。
4. 小鼠ELISA試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心,。
5. 內所配陰性和陽性對照在一次使用前應全部轉移至標本準備區(qū),，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾,，應避免裸手直接接觸PCR反應管,，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置,；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正,，淬滅基因選擇None,。
9. 實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。