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大鼠ELISA試劑盒操作步驟與樣本處理
閱讀:286 發(fā)布時間:2020-12-16大鼠ELISA試劑盒原理:
本試劑盒系由預包被大鼠ELISA試劑盒的酶標板,、酶標記物及其他配套試劑組成,,應用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測豬血清,、血漿樣本中豬瘟病毒抗體,。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬瘟病毒抗體,,則將與酶標板上抗原結合,經(jīng)洗滌除去未結合的其他成分后,;再加入酶標記物,,與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合;再經(jīng)洗滌除去未結合的酶標記物,,在孔中加TMB底物液,,與酶反應形成藍色產物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關,;加入終止液終止反應后,,產物變?yōu)辄S色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,,即可知樣品是否含有豬瘟病毒抗體,。
大鼠ELISA試劑盒操作步驟:
1.使用前將大鼠ELISA試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫,。
2.取所需用量酶標板條,,設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,,未用的板條盡快密封,,2~8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl,;陰,、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl,;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。
4.混勻,置37℃反應30分鐘,。
5.扣去孔內液體,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,重復洗滌5次,,拍干。
6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外),。置37℃反應30分鐘,。
7.洗滌,同步驟5,。
8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl,混勻,,37℃避光反應10分鐘,。
9.每孔加終止液50μl,混勻,,用空白孔調零,,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。
大鼠ELISA試劑盒樣本處理:
1.剛取得的新鮮組織樣本用PBS洗凈,。
2.準確稱取50mg組織,,加入1ml勻漿緩沖液A,用玻璃勻漿器充分勻漿,。
3.在1000g,,4℃離心10分鐘,棄沉淀,,取上清,。