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豬ELISA試劑盒注意事項與步驟
閱讀：254 發(fā)布時間：2020-12-9豬ELISA試劑盒注意事項：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn)。
豬ELISA試劑盒步驟：
1. 間接法測抗體間接法是檢測抗體常用的方法,。其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體(二抗)以檢測與固相抗原結(jié)合的受檢抗體,，故稱為間接法,。操作步驟如下：
1)將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗原,，洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì),。
2)加稀釋的樣本，保溫反應(yīng),。樣本中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,，固相載體上只留下特異性抗體,，樣本中的其他成份在洗滌過程中被洗去。
3)加酶標(biāo)抗抗體,。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗抗體結(jié)合,，從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,，固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關(guān),。
4)加底物顯色。
2.競爭法測抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,，因此不能用雙抗體夾心法進行測定,，可以采用競爭法模式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合,。標(biāo)本中抗原量含量愈多,，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，后的顯色也愈淺,。小分子激素,、藥物等豬ELISA試劑盒多用此法。
如何選擇合適的陽性對照?陽性對照的基本組成應(yīng)該盡量與檢測樣本的組成一致,，一般陽性對照多以含蛋白保護劑的緩沖液為基質(zhì),，加入一定量的待檢物質(zhì)。比如,，以人血清為標(biāo)本的測定,，陽性對照多用確定的病人血清或者以復(fù)鈣人血漿為原料加入一定量標(biāo)準(zhǔn)品。
豬ELISA試劑盒優(yōu)勢特點：
（1）,、*試劑——性,、靈敏性、特異性
（2）,、規(guī)范包被操作——吸附均勻,、吸附性好、空白值低、空底透明度高
（3）,、先進的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
（4）,、適用范圍——適用于體液,、組織勻漿，細胞培養(yǎng)上清液,、尿液等各種類型的樣本,。
（5）、可檢測指標(biāo)齊全——生長因子,、炎癥因子,、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
（6）,、節(jié)省實驗經(jīng)費