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其它源細(xì)胞原代細(xì)胞與傳代培養(yǎng)
閱讀：197 發(fā)布時(shí)間：2020-12-2其它源細(xì)胞原代培養(yǎng)：
1,、取約500mg脂肪組織（自外科手術(shù)患者的皮下獲取）,，再將脂肪組織一次擠壓進(jìn)入準(zhǔn)備好的15m離心管中,，每個(gè)離心管中的組織不超過5ml。
2、吸取緩沖液PBS7ml加入到上述裝有組織的離心管中,，用吸管吹打10~20次，然后靜置1min左右,，用吸管將組織下層的液體吸出,。如此反復(fù)直到所吸出的液體呈透明狀，不帶有血細(xì)胞為止,。
3,、向有其它源細(xì)胞的試管中加入與組織量相同大約5ml左右的消化液（胰酶0.25%，I型膠原酶0.1%以1：1比例混合配制而成）,，將試管密封,，放入37°C恒溫?fù)u床中，190r/min,，震蕩消化30min,。此時(shí)液面分為3層，上層為黃色油狀脂肪細(xì)胞層,，中層為脂肪組織層,，下層為含單個(gè)核細(xì)胞的液體；
4,、吸出離心管中的下層液體移入含*培養(yǎng)基（含10%胎牛血清的高糖DMEM）的新離心管中終止消化,，然后將離心管封閉，1500rpm離心10min,。
5,、用吸管吸取上清后去掉，加入1ml培養(yǎng)基,，輕輕吹打10~20次制成細(xì)胞懸液,，將各個(gè)離心管中的胞懸液收集起來，接種待用,。
6,、在剩余脂肪中加入新的胰酶和膠原酶，重復(fù)以上步驟繼續(xù)消化,，重復(fù)2-3次,，將收集到的有核細(xì)胞按照一定的密度接種到培養(yǎng)瓶中，放入37°C,、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),；
7、次換液：大約12-24小時(shí)后,，觀察細(xì)胞貼壁即可進(jìn)行次換液,，此后每隔3天換液，待細(xì)胞生長至融合后進(jìn)行傳代。
其它源細(xì)胞傳代培養(yǎng)：
1,、在超凈工作臺內(nèi)吸去培養(yǎng)瓶內(nèi)的舊培養(yǎng)基,，加PBS沖洗2-3次，之后加入1-2mL消化液（0.25%胰酶和0.04% EDTA(v/v 1:1)）,。
2,、培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行消化（3-5min），倒置顯微鏡下觀察其它源細(xì)胞形態(tài)變化,，當(dāng)貼壁的脂肪干細(xì)胞胞回縮,，細(xì)胞間隙不斷增大，細(xì)胞呈近球形同時(shí)有少量圓形細(xì)胞脫壁時(shí),，加入等體積的培養(yǎng)基終止消化,。
3、用吸管反復(fù)有序輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞（動(dòng)作要輕柔,，注意不要產(chǎn)生氣泡）,，使細(xì)胞脫離瓶壁后呈單細(xì)胞懸液。
4,、將單細(xì)胞懸液移至離心管中,，離心，(1000rpm,5min),，棄上清,，加入*培養(yǎng)基，輕吹使之松散,，按1:2傳代培養(yǎng),。
其它源細(xì)胞干細(xì)胞：
干細(xì)胞是具有自我復(fù)制和多向分化潛能的原始細(xì)胞，是生命的其它源細(xì)胞,，是形成人體各種組織器官的原始細(xì)胞,。干細(xì)胞技術(shù)是生物治療的前沿技術(shù)，稱之為再生醫(yī)學(xué),。干細(xì)胞是具有自我復(fù)制和多向分化的原始細(xì)胞,，是機(jī)體的起源細(xì)胞，是形成人體各種組織器官的原始細(xì)胞,。
干細(xì)胞是一類具有自我更新能力的多潛能細(xì)胞,，在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞或組織器官,，醫(yī)學(xué)界稱其為"萬用細(xì)胞",。干細(xì)胞是指尚未分化的細(xì)胞，存在于早期胚胎,、胎盤及其附屬物,、骨髓,、外周血和成年組織中，它能夠被培養(yǎng)成肌肉,、骨骼和神經(jīng)等200多種人體細(xì)胞,、組織和器官。干細(xì)胞技術(shù)的作用就是:能再造一種全新的,、正常的甚至更年輕的細(xì)胞,、組織和器官。