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技術(shù)文章

其它類ELISA試劑盒采集和保存方法

閱讀:146          發(fā)布時間:2020-11-18

其它類ELISA試劑盒試驗原理:

試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A,、B,,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系,。

其它類ELISA試劑盒操作步驟:

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,;

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加,。

4.  除空白孔外,,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,,靜置1min,,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板),。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,,37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),,在450nm波長處測定各孔的OD值,。

其它類ELISA試劑盒采集及保存:

1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。保存  過程 中  如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。

2.血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。

3.尿液:用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照此實行。

4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/ 分)。仔細收集上清,。  檢測細胞內(nèi)的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,,以 使細胞破壞并 放出細胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。

5.組織標本:切割標本后,,稱取重量,。加入一定量的PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用。  

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