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人ELISA試劑盒樣本處理實驗要求
閱讀：390 發(fā)布時間：2020-10-7人ELISA試劑盒實驗原理：
人ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被小鼠丙二醇（SDA）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標本,、標準品,、HRP標記的檢測抗體,，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠丙二醇（SDA）呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。
人ELISA試劑盒樣本處理及要求：
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可,，或將上清置于-20℃或-80℃保存,，但應避免反復凍融,。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測,，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融,。
3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果）,，稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比,，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,，可以對勻漿液進行超聲破碎,，或反復凍融。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,，取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或將上清置于-20℃或-80℃保存,，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響*后檢測結果,，因此溶血標本不宜進行此項檢測,。
人ELISA試劑盒注意事項：
1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑,。
2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值,。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,，已經變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果,。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射,。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。
8. 任何反應人ELISA試劑盒不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性,。
9. 不能使用過期產品,。
10. 如果可能傳播疾病,，所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。