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“ELISA試劑盒實驗中背景因素影響”
閱讀：266 發(fā)布時間：2020-3-31“ELISA試劑盒實驗中背景因素影響”
Elisa試劑盒實驗的原理似乎很簡單,，不外乎固定抗原,，添加一抗、二抗和底物,，間中夾雜著洗滌和封閉,。然而，即使是平淡無奇的洗滌和封閉,，如果做得不太好,，也有可能毀了整個實驗。在實驗結(jié)束時,，我們是否能獲得有意義的信息,，這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。背景噪音會影響您對結(jié)果的判斷,。如何降低ELISA的背景,，小編來帶你看看：
Elisa試劑盒洗滌很重要
洗滌很重要，洗滌步驟看似很無聊,，其實很重要,，因為如果未結(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音,。如有必要,，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結(jié)合反應(yīng),。如果背景過高,，而您懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數(shù),。
Elisa試劑盒封閉更關(guān)鍵
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點,。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧,。如果您的背景過高,，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,，或適當(dāng)延長封閉時間,。
如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液,。這可能需要時間,，但也是值得的,。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素,，包括微孔板的表面試劑,、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑,。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用,。
Elisa試劑盒檢測試劑要適量
另一點也很顯而易見：切勿使用過多的檢測試劑,。如果濃度過高，或者未正確稀釋,，則會導(dǎo)致高背景,。也不要顯色過度，如有必要,，優(yōu)化一下何時應(yīng)加入終止液,。
如果您的ELISA不幸地遇到了高背景，那么也無需太擔(dān)心,，依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分，并排除可能存在的問題,。悉心優(yōu)化,，相信很快就會有漂亮的結(jié)果。