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動(dòng)物受到病毒感染后，體內(nèi)產(chǎn)生特異性中和抗體,，并與相應(yīng)的病毒粒子呈現(xiàn)特異性結(jié)合,，因而阻止病毒對(duì)敏感細(xì)胞的吸附,，或抑制其侵入，使病毒失去感染能力,。中和試驗(yàn) (Neutralization Test)是以測(cè)定病毒的感染力為基礎(chǔ),，以比較病毒受免疫血清中和后的殘存感染力為依據(jù)，來判定免疫血清中和病毒的能力,。

交叉保護(hù)中和步驟

1,、將待檢血清用牛血清Hanks 氏液稀釋成1：10，56℃滅活30分鐘,；

2,、進(jìn)一步2倍稀釋血清成1：20、1：40,、1：80……,，對(duì)照血清1：10稀釋；

3,、稀釋兩種病毒（在冰浴中進(jìn)行）至含200pfu/ml,；

4、各連續(xù)稀釋度血清分別與200pfu/ml的兩種病毒液等量混合（各0.3ml）,，置37℃中作用1小時(shí)（每15分鐘振蕩一次）,；

5、吸出各細(xì)胞培養(yǎng)孔中維持液,；

6,、接種長滿單層的Vero-E6細(xì)胞（24孔板），每孔接種血清病毒混合液,、標(biāo)準(zhǔn)血清對(duì)照及兩種病毒對(duì)照 ,，每稀釋度兩孔，100ul/孔,。37℃吸附1小時(shí)，每隔15分鐘搖動(dòng)一次,；

7,、加第yi層瓊脂糖覆蓋液（需冷置42℃左右），每孔1ml,，室溫下待凝固,，細(xì)胞面朝上，置37℃5%CO2孵箱培養(yǎng)7-9天,；

8,、加第二層含中性紅瓊脂糖覆蓋液，1ml/孔,，室溫下待凝固,，細(xì)胞面朝上,，置37℃5%CO2孵箱培養(yǎng)2-5天，從第二天開始觀察空斑數(shù),；

9,、抗體滴度的判定，以比病毒對(duì)照的空斑數(shù)中和或減少50%的血清zui高稀釋度倒數(shù)判為待檢血清中和抗體滴度,；

10,、交叉保護(hù)中和型別判定：根據(jù)同一份血清與兩種病毒的反應(yīng)滴度不同來區(qū)分，如果一份血清與漢灘病毒 （或漢城病毒）反應(yīng)的抗體滴度高于與漢城病毒（漢灘病毒）的抗體滴度4倍或以上,，即判為漢灘病毒型,，反之則為漢城病毒型。兩者滴度相差無幾時(shí),，則不好分型,。不足4倍時(shí)亦不能定型。