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                                                    ELISA小小知識(shí)

      如今生物科技日益突飛猛進(jìn)的時(shí)代,，像ELISA試劑盒產(chǎn)品五花八門品牌也眾多,，讓你目不暇接，那么我們?cè)撊绾芜x擇適合于我們科研實(shí)驗(yàn)用的ELISA試劑盒呢,？我們來(lái)看看ELISA常見技術(shù)指南：

   1,、選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì)；若選擇兩個(gè)單抗,，必須識(shí)別不同表位的抗體,；從同一家公司選擇抗體對(duì)。
   2,、ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定*佳信號(hào)和背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測(cè)抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定,。同時(shí),，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說(shuō)明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作,。
   3,、標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書，注意每批的細(xì)節(jié),。在使用細(xì)胞因子前,，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子,。根據(jù)每批說(shuō)明書中的細(xì)節(jié),，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
   4,、一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過(guò)將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml,。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程,、放大試劑盒,、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度,。
   5,、為了優(yōu)化靈敏度，建議過(guò)夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本,。
   6,、若使用過(guò)氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,，疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物酶的活性,。
   7、當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí),，如血清,，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。
   8,、把試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
   9,、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
   10、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
   11、請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)*后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
   12、封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
   13、底物請(qǐng)避光保存,。