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elisa試劑盒固相免疫測(cè)定的原理
閱讀:467 發(fā)布時(shí)間:2019-5-10 elisa試劑盒固相免疫測(cè)定的原理
基礎(chǔ):抗原或抗體的固相化幾抗原或抗體的酶標(biāo)記,。加入酶反應(yīng)的底物后,,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),,由此進(jìn)行定性或定量分析,。
雙抗體夾心發(fā)
用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋?zhuān)芍苯佑糜跍y(cè)定,,因此其敏感度相對(duì)高與間接法,。乙肝標(biāo)志物中抗HBsAg的檢測(cè)常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備,,應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同,,尋找合適的標(biāo)記方法。
間接法
間接法的優(yōu)點(diǎn):只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立檢測(cè)相應(yīng)抗體的方法,。
競(jìng)爭(zhēng)法
小分子抗原或半抗原缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn),,因此不能用雙抗夾心法進(jìn)行測(cè)定,可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式,。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合,。標(biāo)本中抗原量含量愈多,結(jié)合在固相上酶標(biāo)抗原愈少,,后的顯色也愈淺,。小分子激素、藥物等elisa測(cè)定多用此法,。
俘獲發(fā)
IgM的檢測(cè)常用語(yǔ)傳染病的診斷,。用人抗IgM抗體包被固相,以捕獲血清標(biāo)本中的IgM,。此法常用于病毒性感染的早期診斷,。
生物素-親合素法
固相支持物→ 故相抗原化→特異性IgG(待測(cè)物)→生物素化抗小鼠IgG(Biotin)→HRP-酶標(biāo)鏈親合素(Avidin)→底物及顯色劑→顯色和測(cè)定。