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技術(shù)文章

小鼠I型膠原(COL1)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒操作注意事項

閱讀:323          發(fā)布時間:2018-11-14

小鼠I型膠原(COL1)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒操作中應(yīng)注意以下5個方面,。

1.隨著病情的進展或由其他因素影響,,某些抗體在機體內(nèi)的含量發(fā)生大幅波動,,因此有必要對標本進行預(yù)處理,,例如對血清標本作適當(dāng)稀釋,或離心分離血脂等,。間接法測定中,,標本適當(dāng)稀釋還可降低非特異性反應(yīng)。

2.加樣一般使用加液器,,在ELISA中一般有4次加樣:加標本,、加酶結(jié)合物、加底物和加終止液,。加標本時必須每份標本使用一支移液器吸嘴,,以免交叉污染。加酶結(jié)合物,、底物和終止液時則不需更換吸嘴,。

3.小鼠I型膠原(COL1)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒在成批手工檢測中,還應(yīng)注意操作時差的影響,。加樣及混勻時間的差異,,使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)時間不一致,對競爭法及定量檢測影響很大,,不注意可能會導(dǎo)致錯誤結(jié)果或定量不準,。

4.洗滌是ELISA操作過程中決定實驗成敗的一個關(guān)鍵步驟。目的是除去未結(jié)合的免疫反應(yīng)物,,終止抗原抗體反應(yīng),,除去標本中與反應(yīng)無關(guān)的成分、游離的酶標物以及反應(yīng)過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì),??捎孟窗鍣C洗板或手工洗板,前者洗滌質(zhì)量較好,,各反應(yīng)孔洗滌效果均一,,批內(nèi)、批間差異小,,手工洗板應(yīng)注意控制各孔洗滌效果,,差異不宜太大。

5.準確判定結(jié)果須使用ELISA測讀儀(酶標儀),,比色法判讀可選擇單波長或雙波長,,根據(jù)反應(yīng)液顏色的不同選用不同波長的濾光片,以空白孔校零測定反應(yīng)孔的吸光度值(A值),。酶標儀具有良好的重復(fù)性。

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